NDRG2基因通過Zc3h12d酶在核轉(zhuǎn)錄因子-κB傳導(dǎo)通路調(diào)控中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　研究NDRG2基因與Zc3h12d酶在核轉(zhuǎn)錄因子（NuclearTranscriptionFactor，NF）-κB傳導(dǎo)通路調(diào)控中的作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）用脂多糖（LPS）刺激人支氣管氣道上皮（16HBE）細(xì)胞株，來構(gòu)建炎性刺激時(shí)氣道黏液高分泌模型，用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過表達(dá)NDRG2和zc3h12dsiRNA干擾下調(diào)16HBE，
　?。?）將細(xì)胞分成如下組：
　　A：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過表達(dá)NDRG2

2、組；
　　B：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過表達(dá)NDRG2組+zc3h12dsiRNA干擾下調(diào)組；
　　C：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染zc3h12dsiRNA干擾下調(diào)組；
　　D：轉(zhuǎn)染空白載體組；
　　E：未做任何處理的16HBE細(xì)胞作為對(duì)照組。
　?。?）倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率，反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測(cè)氣道黏蛋白（Mucin，MUC）5ACmRNA的表達(dá)水平，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)IL-1β、IL-6等炎癥因子及MUC5

3、AC的分泌水平，Western印跡法檢測(cè)Zc3h12d、NF-κBp65的分泌水平，激光共聚焦法檢測(cè)16HBE細(xì)胞內(nèi)MUC5AC表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　（1）NDRG2轉(zhuǎn)染后其蛋白表達(dá)明顯增多，提示轉(zhuǎn)染成功。Zc3h12dsiRNA轉(zhuǎn)染后，其表達(dá)蛋白減少，提示轉(zhuǎn)染成功。光鏡下檢測(cè)NDRG2及Zc3h12d的轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示NDRG2效率約65％，Zc3h12d轉(zhuǎn)染效率約50%。
　?。?）給予LPS刺激后，RT-PC

4、R測(cè)定MUC5ACmRNA較未做任何處理的對(duì)照組明顯升高（p＜0.05）。當(dāng)細(xì)胞過表達(dá)NDRG2，RT-PCR測(cè)定MUC5ACmRNA較LPS刺激轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組明顯下降（p＜0.05）。但同時(shí)使細(xì)胞過表達(dá)NDRG2和下調(diào)Zc3h12d，MUC5ACmRNA較單純過表達(dá)NDRG2組明顯升高（p＜0.05），而下調(diào)zc3h12d組無明顯差異（p>0.05）。
　　（3）給予LPS刺激后，NF-κBp65的表達(dá)較未做任何處理的對(duì)照組明顯增

5、多，而Zc3h12d較未做任何處理的對(duì)照組明顯減少。當(dāng)細(xì)胞過表達(dá)NDRG2，Western-blot法檢測(cè)表明Zc3h12d表達(dá)較空白轉(zhuǎn)染組增多，而相應(yīng)的NF-κBp65表達(dá)明顯降低（p＜0.05）。但同時(shí)過表達(dá)NDRG2和下調(diào)Zc3h12d組，相應(yīng)的NF-κBp65表達(dá)較單純過表達(dá)NDRG2組表達(dá)明顯升高（p＜0.05），但較瞬時(shí)轉(zhuǎn)染zc3h12dsiRNA干擾下調(diào)組無明顯差異（p>0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）LP