硫化氫對離體家兔腎動脈血管環(huán)張力調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用離體血管環(huán)張力測定技術(shù)觀察H2S對家兔離體腎動脈血管環(huán)張力的調(diào)節(jié)作用，探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：①在試管中加入1％（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）醋酸鋅0.5 ml，蒸餾水2.5 ml，血漿0.1 ml，混勻。然后加入7.2 mol/L鹽酸（含20 mmol/L N，N-二甲基-對苯二胺鹽酸鹽）0.5 ml，再加入1.2 mol/L HCl（含30 mmol/L FeCl3）0.4 ml，室溫孵育20 min，然后加入10％三氯

2、醋酸1 ml。將上述試管內(nèi)容物離心5 min后取上清，用分光光度計在665 am波長處檢測光吸收度。用H2S標(biāo)準(zhǔn)曲線計算血漿H2S濃度，結(jié)果用μmol/L表示。②取家兔的腎動脈在冰冷的磷酸鉀緩沖液（50 mmol/L，pH6.8）中研磨成勻漿。反應(yīng)在25 ml錐形瓶中進(jìn)行。反應(yīng)體積1 ml，含磷酸鉀緩沖液（100 mmol/L，pH7.4）、L-半胱氨酸（10mmol/L）、5’-磷酸吡哆醛（2 mmol/L）和10％（V/V）組織勻漿

3、。在中央室中加入10％（W/W）醋酸鋅0.5 ml，并放入濾紙增加吸收面積。用N2將燒瓶充盈30 s后，石蠟?zāi)し饪?，轉(zhuǎn)移到37℃水浴搖床中開始反應(yīng)，90 min后向其中注入50％（W/W）三氯醋酸0.5 ml中止反應(yīng)，繼續(xù)水浴60 min。將中央室的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含3.5 ml蒸餾水的試管中，加入20 mmol/L，對苯二胺鹽酸鹽0.5 ml和30 mmol/L FeCl30.4 ml，20 min后用分光光度計在665 nm波長處檢測光

4、吸收度。用H2S標(biāo)準(zhǔn)曲線計算溶液中H2S含量，H2S產(chǎn)出率由（pmol/mg protein/minute）來表示，反映CSE的活性。③運(yùn)用離體血管環(huán)灌流系統(tǒng)，觀察硫化氫作用后血管環(huán)張力的變化，由RM6240生物信號采集處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄分析，檢測血管環(huán)張力的變化并探討其可能的機(jī)制。
　　 結(jié)果：⑴正常兔血漿中H2S的含量為（44.39±4.9）μmol/L；⑵正常家兔腎動脈上H2S生成率為（143.94±4.80）pmol/mg

5、protein/minute；⑶外源性的H2S（NaHS50，100，200，400，800μmol/L）可以劑量依賴性地舒張由KCl（50 mmol/L）預(yù)收縮的腎動脈血管環(huán)，其濃度反應(yīng)曲線的IC50值為281.46±17.26μmol/L，最大舒張率為89.97±2.40％；⑷用KATP通道阻斷劑格列苯脲（glibenclamide，20μmol/L）、鈣通道的開放劑Bay K8644（500 nmol/L）、NO合酶的抑制劑L-N

6、AME（100μmol/L）和環(huán)氧合酶阻斷劑吲哚美辛（10μmol/L）預(yù)處理以及去除血管內(nèi)皮后，H2S的舒張效應(yīng)均被顯著抑制，濃度反應(yīng)曲線均明顯右移，其IC50值分別增大為（299.69±8.64μmol/L，P<0.05）、（405.32±2.84μmol/L，P<0.05）、（369.25±0.85μmol/L，P<0.05）、（387.18±26.26μmol/L，P<0.01）和（331.15±4.13μmol/L，P<0.0

7、5）。且格列苯脲、Bay K8644和去除血管內(nèi)皮后使最大舒張率分別減小為（68.65±4.31％，P<0.01）、（80.10±3.11％，P<0.05）和（76.03±2.35％，P<0.01），但應(yīng)用L-NAME和吲哚美辛并沒有改變H2S的最大舒張作用；⑸預(yù)先給予鳥苷酸環(huán)化酶的抑制劑ODQ（10μmol/L）以及EDHF的抑制劑apamin（50 nmol/L）和charybdotoxin（50 nmol/L）預(yù)處理后，對H2S的

8、舒張作用沒有顯著改變，其IC50值分別為（295.31±16.07μmol/L，P>0.05）和（261.47±36.57μmol/L，P>0.05）；⑹做KCl（5，15，25，35，45，55，65 mmol/L）收縮腎動脈環(huán)的量效曲線，其IC50值為14.91±0.16 mmol/L；⑺先給予H28合酶的抑制劑PPG預(yù)處理后，KCl的濃度量效曲線左移，其IC50值減小為（11.65±1.08 mmol/L，P<0.05）；⑻先給予

9、H2S（NaHS200μmol/L）預(yù)處理后，KCI的濃度量效曲線右移，其IC50值增大為（19.16±1.09 mmol/L，P<0.05）。
　　 結(jié)論：①正常家兔血漿中含有H2S；②正常家兔腎動脈含有CSE，且能產(chǎn)生H2S；③實驗數(shù)據(jù)表明H2S對腎動脈有舒張作用，此作用是由直接開放血管平滑肌上的KATP通道，同時關(guān)閉鈣通道來實現(xiàn)的；且此作用是內(nèi)皮依賴型的，與一氧化氮和前列環(huán)素有協(xié)同舒張作用，但與鳥苷酸環(huán)化酶途徑和EDHF途