促紅細胞生成素改善肝臟脂質(zhì)沉積的機制研究.pdf

1、目的:觀察促紅細胞生成素(EPO)對肝臟脂質(zhì)沉積的影響并探究其可能的分子機制。
　　方法:雄性8周齡遺傳型肥胖小鼠(ob/ob)按隨機數(shù)字表隨機分為兩組，一組腹腔注射EPO(3000 U/kg)，即EPO組（ob/ob+EPO，n=6），另一組注射等量磷酸鹽緩沖液(PBS)，即PBS組（ob/ob+PBS，n=6），同窩野生型C57BL/6小鼠作為正常對照組（C57BL/6，n=6），藥物干預(yù)5周末，檢測各組小鼠的體重、攝食量、血

2、脂水平及血清胰島素水平，并行小鼠腹腔糖耐量實驗(IPGTT)。體外環(huán)境下，以棕櫚酸(PA，0.5 mmol/L)及EPO(10 U/ml)處理人HepG2細胞，分為CON組、CON+EPO組、PA組及PA+EPO組。蘇木精-伊紅(HE)及油紅O染色觀察各組小鼠肝組織及HepG2細胞形態(tài)變化及脂質(zhì)沉積情況。蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測各組小鼠肝臟及HepG2細胞中EPO受體(EPOR)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(SREBP

3、-1c)、脂肪酸合酶(FAS)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸轉(zhuǎn)位酶(CD36)、脂肪酸連接蛋白1(FABP1)、肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1a(CPT-1a)及CPT-2的蛋白水平。實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)檢測各組小鼠肝臟組織中脂質(zhì)攝取轉(zhuǎn)運相關(guān)分子CD36、FABP1、脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白2/5(FATP2/5)，脂質(zhì)合成相關(guān)分子SREBP-1c、FAS、ACC、硬脂酰輔酶A去飽和酶1（SCD-1）及脂質(zhì)氧化分泌相關(guān)分子CPT-

4、1a、CPT-2、脂酰輔酶A氧化酶1(ACOX1)、肉堿脂?；D(zhuǎn)移酶(CACT)、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白(MTTP)的基因表達水平。多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差異法。
　　結(jié)果:EPO組小鼠體重、攝食量、血清甘油三酯、膽固醇及游離脂肪酸均較PBS組降低。糖耐量實驗中EPO組血糖值曲線下面積也較PBS組減少(P＜0.05)。HE染色顯示ob/ob小鼠肝細胞空泡化、肝索紊亂，EPO組肝細胞空泡減少，形態(tài)有所

5、恢復(fù)。油紅O染色顯示EPO干預(yù)的小鼠肝細胞及HepG2細胞內(nèi)橘紅色脂滴數(shù)均較各自對照組減少。Western blot結(jié)果顯示EPO組小鼠肝臟及PA+EPO組HepG2細胞中SREBP-1c、FAS、ACC、CD36及FABP1蛋白水平下降(均P＜0.05)，EPOR和CPT-1a蛋白水平較對照組升高（均P＜0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示EPO組小鼠肝臟中SREBP-1c、FAS、ACC、SCD-1、CD36、FABP1、FATP5的m