擬南芥TUA2基因參與ABA脅迫下種子萌發(fā)過程的研究.pdf

1、微管蛋白是一種在真核細(xì)胞中普遍表達(dá)的蛋白,由α微管蛋白(TUA)和β微管蛋白(TUB)組成的微管蛋白異二聚體構(gòu)成。在擬南芥中共有6種不同的TUA基因亞型和9種不同的TUB基因亞型。許多研究證實(shí),不同的微管蛋白基因亞型在特定的發(fā)育階段或組織細(xì)胞中高效表達(dá),隨著外界環(huán)境脅迫表達(dá)量也會發(fā)生變化。因此,微管蛋白基因不僅僅是持家基因,也參與眾多的信號應(yīng)答反應(yīng)。
　　 本研究以TUA2基因亞型表達(dá)變化的突變體為材料。利用反向遺傳學(xué)的方法,運(yùn)

2、用遺傳轉(zhuǎn)化,Tail PCR,半定量PCR等技術(shù)進(jìn)行TUA2參與ABA脅迫下種子萌發(fā)過程的研究。
　　 主要結(jié)果如下:
　　 1.通過生理檢測我們在若干個T-DNA插入突變體中發(fā)現(xiàn)了一個對ABA敏感的突變體。運(yùn)用Tail PCR的方法找到了T-DNA的插入位點(diǎn)位于TUA2基因上游啟動子區(qū),并發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)的插入導(dǎo)致突變體中TUA2基因表達(dá)量提高。另外我們在SALK庫也找到了相應(yīng)位點(diǎn)的突變體。并通過遺傳轉(zhuǎn)化的方法得到了三種不同

3、株系的TUA基因超表達(dá)體。
　　 2.構(gòu)建了TUA2基因的亞細(xì)胞定位轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體,運(yùn)用基因槍轉(zhuǎn)化的方法將TUA2基因和GFP融合基因在洋蔥表皮瞬時表達(dá),結(jié)果顯示TUA2主要在細(xì)胞膜上分布。
　　 3.通過對ABA脅迫下種子萌發(fā)率的檢測發(fā)現(xiàn)TUA2基因突變體,超表達(dá)體均出現(xiàn)了種子萌發(fā)的延遲。推測TUA2可能參與了ABA對種子萌發(fā)的調(diào)控過程。
　　 4.通過RT-PCR的方法對ABA途徑相關(guān)基因表達(dá)量進(jìn)行分析的結(jié)果