Urocortin I后處理對(duì)缺氧-復(fù)氧大鼠心肌細(xì)胞線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔及凋亡蛋白Bax、Bcl-2的影響.pdf

1、目的：觀察Urocortin I后處理對(duì)缺氧/復(fù)氧大鼠心肌細(xì)胞線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔及凋亡蛋白Bax、Bcl-2的影響，探究Urocortin I后處理產(chǎn)生心肌保護(hù)效應(yīng)的線粒體機(jī)制。
　　方法：利用離體心臟灌注裝置（MPA）分離成年大鼠心肌細(xì)胞，將培養(yǎng)24h后的細(xì)胞隨機(jī)分為正常組（Nor組）、缺氧/復(fù)氧組（HR組）、UrocortinⅠ后處理組（UcnⅠ組）、5-羥葵酸拮抗UrocortinⅠ組（5-HD+UcnⅠ組）。按下述實(shí)驗(yàn)條件

2、進(jìn)行處理：Nor組：37℃培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)150min；HR組：缺氧40min后，復(fù)氧110min；UcnⅠ后處理組：缺氧40min后復(fù)氧10 min，然后在含Uc nⅠ的培養(yǎng)基中處理30 min后再?gòu)?fù)氧70min；5-HD+Uc nⅠ組：在給予UcnⅠ處理前先用特異性線粒體ATP敏感性鉀通道（mitoKATP）拮抗劑5-HD處理10min，余處理同UcnⅠ組。于復(fù)氧末對(duì)比觀察各組細(xì)胞（1）倒置相差顯微鏡下線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)

3、的變化；（2）倒置相差顯微鏡下線粒體膜電位(MMP)的變化；（3）倒置相差顯微鏡下活性氧自由基(ROS)的變化；（4）Western-Blot法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)水平；（5）CCK-8試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞活力。
　　結(jié)果：1. mPTP及ROS的變化：Nor組心肌細(xì)胞mPTP及ROS熒光強(qiáng)度較其余各組低（P＜0.01）；Ucn I組及5-HD+Ucn I組較HR組低（P＜0.01），但5-HD+Ucn I組

4、高于Ucn I組（P＜0.01）。
　　2.MMP的變化：Nor組心肌細(xì)胞MMP熒光強(qiáng)度較其余各組高（P＜0.01）；Ucn I組雖低于Nor組，但高于HR組及5-HD+Ucn I組（P＜0.05）；5-HD+Ucn I組與HR組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平：Nor組心肌細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)水平較其余各組低，而B(niǎo)cl-2蛋白表達(dá)水平較其余各組高（P＜0.01）；Ucn I組Bax蛋

5、白表達(dá)水平低于HR組及5-HD+Ucn I組（P＜0.05），而B(niǎo)cl-2蛋白表達(dá)水平高于HR組及5-HD+Ucn I組（P＜0.05）；5-HD+Ucn I組與HR組相比Bax與Bc l-2蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.細(xì)胞活力的變化：Nor組心肌細(xì)胞活力較其余各組高（P＜0.01）；Ucn I組雖較Nor組低，但高于HR組及5-HD+Ucn I組（P＜0.05），而5-HD+Ucn I組與H/R組差異