過表達CCR7的C3H10 T1-2細胞在小鼠皮膚移植模型的免疫抑制作用的研究.pdf

1、在整形外科領域，會經常面對由大面積燒傷、創(chuàng)傷、腫瘤切除帶來的機體組織及器官缺損及功能障礙。相比于自體組織移植修復，異體復合組織移植(CTA)無疑是目前臨床可選的最可靠的一種修復手段。但是移植術后的免疫排斥反應一直是異體復合組織移植難以逾越的障礙。目前臨床上主要使用各類免疫抑制藥物來避免和減輕移植后的免疫排斥反應，但有效的免疫抑制藥物不僅費用高昂，而且伴有增加感染風險以及惡性腫瘤發(fā)生幾率的副作用，長期使用帶來的血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及肝腎功能

2、的損害更會嚴重影響患者的生活質量。近年來，人們發(fā)現(xiàn)了間充質干細胞(MSCs)具有調控移植免疫的能力，MSCs獨有的便捷性、安全性更是讓其成為了研究熱點。經過多年研究，間充質干細胞對于移植后免疫反應的調節(jié)能力已得到了學界的廣泛肯定，在臨床試驗性治療中也得到了認可。
　　目前MSC的免疫抑制作用機制尚不完全清楚，一般認為間充質干細胞的免疫調節(jié)功能可能是通過分泌各種細胞因子以及對免疫細胞的直接接觸而產生抑制作用。次級淋巴器官(SLOs)

3、已被發(fā)現(xiàn)在MSC的移植免疫調節(jié)中起著至關重要的作用。而MSC進行GVHD治療的效果不夠理想，很有可能是緣于全身注射治療后細胞歸巢的低效引起的。CC趨化因子受體7[CCR7]是一類趨化因子受體，其配體為趨化因子配體21[CCL21]，由次級淋巴器官組織分泌。CCL21可以誘導表達CCR7的細胞定向趨化至脾臟、淋巴結等次級淋巴器官。C3H10 T1/2細胞系是符合間充質干細胞定義的，在實驗室應用廣泛的小鼠間充質干細胞系，具有細胞類型單一、生

4、長快速穩(wěn)定等特點。
　　為進一步探討表達CCR7的MSC在復合組織移植中的免疫調節(jié)作用，本研究通過建立同種異系小鼠背部皮膚移植模型，以輸注正常和轉染并表達CCR7的C3H10 T1/2細胞(MSCs)為干預手段，觀察皮片移植12d后存活面積、HE染色皮片病理變化及小鼠脾淋巴細胞中Th17細胞、調節(jié)性T細胞(Treg)細胞表達比例，用以綜合評估CCR7的表達對MSCs在移植小鼠體內的免疫調節(jié)能力的影響。
　　目的:旨在研究小鼠

5、CCR7+ MSCs間充質干細胞系是否在小鼠皮膚移植模型中具有比原始C3H10細胞具有更強的免疫調節(jié)作用。
　　方法:以穩(wěn)定的小鼠C3H10細胞系培養(yǎng)擴增細胞，并利用慢病毒工具轉染EGFP-CCR7基因;以C57BL6小鼠為供體獲取皮片，以BALB/c小鼠為受體建立小鼠同種異系皮膚移植模型;實驗動物分4組:CCR7+細胞組、C3H10組、同種異系對照組和同系對照組（受者小鼠移植同系小鼠皮片），分別于移植模型成功當天經尾靜脈注射1×

6、106 CCR7+C3H10細胞、1×106C3H10細胞、等體積生理鹽水（對照組）;觀察皮片移植后的存活情況，并于皮片移植第12天測定小鼠脾淋巴細胞中TH17與Treg的細胞比例，HE染色觀察皮片病理變化。
　　結果:受者小鼠皮片移植后12天，外觀、病理以及流式細胞結果表明CCR7+組與C3H10組的皮片存活情況均優(yōu)于同種異系對照組，CCR7+組皮片移植后存活情況優(yōu)于C3H10組，且移植免疫反應程度輕于C3H10組。