土壤細(xì)菌抑制綠僵菌作用機(jī)理的初步研究.pdf

1、綠僵菌（Metarhizium spp.）是一種分布廣泛、寄主多樣的昆蟲病原真菌，在農(nóng)林害蟲微生物防治中扮演著重要的角色，平沙綠僵菌（Metarhizium pingshaense）wp08菌株對竹林優(yōu)勢種篩胸梳爪叩甲（Melanotus cribricollis）幼蟲（即金針蟲）具有較高毒力，但田間防治效果不佳，土壤的抑真菌作用是影響該菌防效的主要原因之一。為探究土壤對綠僵菌的抑制作用，本文測定了土壤對綠僵菌wp08菌株的抑制效果，并

2、從土壤中分離出對綠僵菌wp08菌株有抑制作用的不動桿菌，利用SPME-GC/MS法分析鑒定其揮發(fā)物中具有抑菌活性的化合物，確定了不動桿菌的代謝產(chǎn)物及揮發(fā)物是其抑制綠僵菌萌發(fā)的主要因素。并利用高通量測序技術(shù)，分析了綠僵菌與土壤細(xì)菌群落變化的關(guān)系，為研究土壤對綠僵菌的抑制作用及改善綠僵菌田間防效提供一定的基礎(chǔ)信息。研究主要內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.分別在培養(yǎng)16h、24 h、36h、48 h后，測定土壤對綠僵菌wp08菌株孢子萌發(fā)的影

3、響，經(jīng)統(tǒng)計(jì)各個(gè)時(shí)段綠僵菌wp08菌株孢子在非滅菌土與滅菌土中的萌發(fā)率均表現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.05)。從分離自土壤的54株細(xì)菌中篩選出了8株對綠僵菌wp08菌株孢子萌發(fā)率有顯著抑制作用的菌株。經(jīng)鑒定8株細(xì)菌均屬于不動桿菌（Acinetobacter），受其揮發(fā)物抑制，綠僵菌wp08菌株孢子在培養(yǎng)48 h時(shí)，萌發(fā)率不足30％，對照萌發(fā)率為96.4％。在含有細(xì)菌發(fā)酵液的培養(yǎng)基上，萌發(fā)率隨發(fā)酵液濃度的增加而下降，在培養(yǎng)96 h后，最低萌發(fā)率

4、僅為6％。其揮發(fā)物對綠僵菌wp08菌株菌絲生長無明顯影響，發(fā)酵液對菌絲有抑制作用，兩者對產(chǎn)孢量影響差異不顯著。將發(fā)酵液加到土壤中后，綠僵菌wp08菌株對篩胸梳爪叩甲幼蟲毒力下降，LT50從12.7 d上升到20.9 d。
　　2.通過GC-MS分析，從不動桿菌發(fā)酵液的揮發(fā)物中共鑒定出21種化合物，主要包括芳香族化合物(76.4％)、烷烴類(7.32％)、烯烴類(3.06％)、酮類(6.1％)、醌類(1.69％)。其中二丁基羥基甲苯

5、、莰酮、苯并噻唑、苯胺等可能是不動桿菌抑制綠僵菌wp08菌株的活性物質(zhì)。
　　3.通過Miseq高通量測序平臺研究了施入綠僵菌后，土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的變化，分別從門、科、屬的水平上分析了優(yōu)勢群落隨取樣時(shí)間的變化。優(yōu)勢菌群變形菌門、酸桿菌門、放線菌門群落豐度變化差異不顯著(P＞0.05)，而綠彎菌門在60 d時(shí)群落豐度顯著提高(P＜0.05)。在科水平上菌群Proteobacteria unclassified隨取樣時(shí)間發(fā)生了顯著降低