簡介：ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERS塒FORTHEDEGREEOFMASTERIILLPACTOFUPREGULATINGINSULINLIKEGROWTHFACTORBINDINGPROTEINRELATEDPROTEIN1IGFBPRP1GENEONHUMANENDOMETRIALCANCER1一AHEC一1ABI0109ICAL向NCTIONBYXIAOFENZHANGSUPEⅣISORPROFRUIXIAGUOPROFESSIONOFOBESTETRICSANDGYNECOLOGYTHEFIRSTAMLIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMARCH2014摘要上調(diào)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1對子宮內(nèi)膜癌細胞系HEC一1A生物學(xué)功能的影響碩士研究生張曉芬導(dǎo)師郭瑞霞教授鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科鄭州市450052摘要背景與目的近些年來子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)病率逐年上升。肥胖，高血壓，糖尿病和血脂異常的多種危險因素共同構(gòu)成的代謝綜合征與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)病密切相關(guān)。而胰島素抵抗是代謝綜合征的中心環(huán)節(jié)。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白INSULIN1IKEGROWMF．ACTORBINDINGPROTEINS，IGFBPS是胰島素樣生長因子INSULIN．1IKEGROWMFACTOR，IGF體系中的重要成員，其中包括與IGF有較高的結(jié)合能力的IGFBPL6，及新近發(fā)現(xiàn)的與胰島素有較高結(jié)合能力的IGFBP7．15，又被稱為胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白INSULINLIKEGROWTHFACTORBINDINGPROTEINRELATEDPROTEIN，IGFBP．RP，其中研究最多最重要的是LGFBP．RPL，與IGFBPL．6相比，LGFBP．RPL與IGFL和IGF2的結(jié)合能力分別要弱5倍和20．25倍，但與胰島素的結(jié)合能力要強500倍。胰島素和IGFBP．RPL結(jié)合后使胰島素降低或喪失正常生理作用，導(dǎo)致機體胰島素敏感性下降，引起胰島素抵抗，從而參與一些惡性腫瘤如結(jié)腸癌、乳腺癌等的發(fā)生發(fā)展，并且高胰島素血癥和低IGFBP．RPL水平是子宮內(nèi)膜癌的高危因素。但是1GFBP．RPL在子宮內(nèi)膜癌細胞發(fā)揮何種作用尚不清楚，因此，本研究應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將重組質(zhì)粒PEX一2_IGFBP．RPL轉(zhuǎn)染LGFBP．RPL低表達的子宮內(nèi)膜癌細胞系HEC．1A，觀察上調(diào)LGFBP．RPL對子宮內(nèi)膜癌細胞系HEC．1A的增殖速率，凋亡及細胞周期的影響，探討1GFBP．RPL在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)揮的具體作用。

簡介：背景與目的腎細胞癌是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一發(fā)病率約占成人全身惡性腫瘤的3％其中80為透明細胞癌全球每年大約有200000人死于腎癌而且發(fā)病率和死亡例數(shù)仍在不斷增加外科手術(shù)是治療早期腎癌的有效手段之一包括根治性腎切除術(shù)及腎部分切除術(shù)腎癌的總體5年生存率只有5060腫瘤的生長依賴于血管的新生抑制腫瘤血管生成已經(jīng)成為腫瘤治療的一種策略。VEGF可特異性促進內(nèi)皮細胞增殖、參與血管生成、增加血管通透性等在動物胚胎發(fā)育、傷口修復(fù)、腫瘤發(fā)生等多種生理及病理過程中發(fā)揮重要作用。因此VEGF及其受體成為目前抗腫瘤血管形成治療最為成熟的靶分子。RNAI技術(shù)不僅在功能基因組研究中發(fā)揮了重要用而且是一種潛在的以特異性基因沉默為方法治療疾病的手段。尤其在腫瘤的干預(yù)中更具有潛在意義。本課題利用RNAI技術(shù)沉默腎細胞癌細胞中VEGF的表達抑制腎細胞癌細胞株的增殖、生長、侵襲和遷移為其臨床開發(fā)和探索腫瘤治療的新途徑提供實驗和理論基礎(chǔ)。方法化學(xué)合成針對VEGF的小干擾RNA通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至腎癌細胞株ACHN中收集細胞通過蛋白印跡方法檢測VEGF的表達臺盼藍拒染法測定細胞生長曲線、MTT比色法檢測細胞增殖TUNEL方法檢測凋亡率AR法檢測凋亡率AR細胞黏附實驗和劃痕實驗測定細胞的黏附及遷移能力TRANSWELL法檢測細胞侵襲能力。結(jié)果SIRNA12組VEGF蛋白表達水平明顯低于空白對照組及陰性對照組生長曲線表明與空白對照組及陰性對照組相比SIRNA12組ACHN細胞的生長明顯減慢。在24H、48H、72HSIRNA1組的增殖抑制率分別為189、327、403和SIRNA2組增殖抑制率分別為276、506、678均高于空白對照組及陰性對照組P﹤005SIRNA1組的細胞凋亡率為10793和SIRNA2組的細胞凋亡率為173274均高于空白對照組及陰性對照組P﹤005其中SIRNA2對ACHN細胞的IR、AR和VEGF蛋白表達的抑制作用均顯著高于SIRNA2組P﹤005。細胞黏附試驗結(jié)果顯示與空白對照組相比SIRNA12組的細胞黏附數(shù)量明顯下降815±31VS405±26P﹤005815±31VS225±24P﹤005其中以SIRNA2組最為明顯劃痕試驗表明與空白對照組相比SIRNA12組的細胞遷移數(shù)量明顯下降162±9VS81±5P﹤005162±9VS38±4P﹤005TRANSWELL試驗結(jié)果顯示與空白對照組比較SIRNA1組和SIRNA2組腎癌細胞侵襲能力明顯下降P結(jié)論VEGF在腎細胞癌細胞中高表達且在腎細胞癌細胞株的增殖、凋亡、黏附、遷移和侵襲中發(fā)揮著重要作用化學(xué)合成的VEGFSIRNA能特異性抑制腎細胞癌ACHN細胞株中VEGF的表達抑制細胞生長增殖促進細胞凋亡可抑制腎細胞癌細胞黏附、遷移和侵襲能力。RNAI有望成為腎細胞癌靶向治療的重要手段。

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文體外胃癌間質(zhì)成纖維細胞模型的建立和生物學(xué)特性初步研究姓名張浩申請學(xué)位級別碩士專業(yè)普通外科學(xué)指導(dǎo)教師畢建威20070501

簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文腫瘤相關(guān)抗原CHP2對卵巢癌細胞生物學(xué)行為的影響姓名靳瓊申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師孔北華20070510山東大學(xué)碩士學(xué)位論文腫瘤相關(guān)抗原CHP2對卵巢癌細胞生物學(xué)行為的影響研究生靳瓊導(dǎo)師孔北華中文摘要【研究背景和目的】卵巢癌是女性生殖器官常見的腫瘤之一，但其發(fā)病機制還不十分明確，腫瘤特異／相關(guān)抗原的鑒定、分離及其生物學(xué)功能的探討是當前腫瘤研究的熱點方向之一。CHP2CALCINCURINHOMOLOGOUSPROTEIN2是最近從肝細胞性肝癌中篩選出的腫瘤相關(guān)抗原，可表達于某些腫瘤如肝癌、結(jié)腸癌、宮頸癌及白血病等組織細胞，而在相應(yīng)的正常組織或細胞中沒有檢測到表達，其生物學(xué)功能目前尚不清楚。本研究旨在探討CHP2在卵巢癌細胞中的表達狀況及其對卵巢癌細胞生物學(xué)行為的影響?！痉椒ā?、CHP2在卵巢癌組織中的表達應(yīng)用RTPCR法測定20例正常人卵巢組織和20例卵巢上皮癌組織中CHP2MRNA的表達。2、質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)染構(gòu)建PEGFPN1CHP2表達載體，并通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法。將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入OVCAR3細胞中，并篩選出穩(wěn)定克隆。實驗分為3組，CHP2基因轉(zhuǎn)染組OVCAR3／CHP2組、空載體轉(zhuǎn)染組OVCAR3悄CO組和空自對照組OVCAR3組。3、CHP2和NA／HEXCHANGERISOFORM1OQ艦1在OVCAR3細胞中表達的鑒定利用RTPCR技術(shù)檢測OVCIAR3細胞中CHP2和NHEL轉(zhuǎn)錄水平的表達。用熒光顯微鏡下觀察的方法檢測3組細胞中CHP2綠色熒光融合蛋白水平的表達。4、細胞增殖實驗將處于對數(shù)生長期的OVCAR3／CHP2、OVCAR3／NEO和OVCAR3以相同數(shù)量接種后應(yīng)用細胞活力儀每隔124時對活細胞進行計數(shù)繪制生長曲線。5、粘附實驗與上述相同辦法分組及制備細胞，分別于15RAIN、30MIN60RAIN或90MIN用細胞活力儀分別計數(shù)上清中和貼附的細胞數(shù)，計算細胞粘附率。6、劃痕實驗將細胞以相同數(shù)量接種于預(yù)先包被有FNFIBRONECTIN的6

簡介：本研究擬建立體外誘導(dǎo)擴增VΑ24NKT細胞的方法，探討特異抗原和細胞因子對擴增的影響；其次評價擴增的VΑ24NKT細胞的特性以及細胞因子對其特性的影響；確定VΑ24NKT細胞體外腫瘤殺傷活性以及對同種反應(yīng)性T細胞免疫應(yīng)答的抑制；初步論證VΑ24NKT細胞在人小鼠異種移植中的作用。本研究顯示ΑGALCER能刺激成人外周血或臍帶血單個核細胞中的VΑ24NKT細胞短期內(nèi)大量擴增。外周血擴增效果優(yōu)于臍帶血。臍帶血CD34細胞能在不含NKT細胞特異配體的細胞因子培養(yǎng)體系中誘導(dǎo)擴增VΑ24NKT細胞，但效率相對較低。IL2和IL15是ΑGALCER刺激擴增VΑ24NKT細胞的基礎(chǔ)細胞因子。在ΑGALCER存在時，IL2和IL15趨向于促進CD4NKT細胞優(yōu)先擴增。在此基礎(chǔ)上，IL12、IFNΓ促進CD4NKT優(yōu)先擴增，IL7則促進CD4NKT細胞擴增。經(jīng)ΑGALCER擴增的VΑ24NKT細胞能在有絲分裂原刺激下出現(xiàn)體外增殖反應(yīng)；并能大量生成IL4和IFNΓ，以IFNΓ為主。IL7主要通過作用于CD4NKT細胞而促進IL4的生成；IL12和IFNΓ可能促使IFNΓ的生成。這種可能效應(yīng)是通過無差異地作用于CD4和CD4細胞亞群來實現(xiàn)。VΑ24NKT細胞能有效殺傷腫瘤細胞系HL60、KGLA和RAJI，對NK細胞敏感細胞系K562無效；同時VΑ24NKT細胞能有效抑制同種反應(yīng)性T細胞免疫應(yīng)答。在人小鼠GVHD模型中，體外擴增的VΑ24NKT細胞可能有助于抵御致死性GVHD。

簡介：CXCR4SDF1Α是目前最受關(guān)注的一對趨化因子配體和受體，相關(guān)研究揭示它們參與了細胞的生長、發(fā)育、分化和增殖等多種生理功能，并在多種病理過程中發(fā)揮重要作用。CXCR4SDF1Α為人們廣為熟知的生物學(xué)功能是在炎癥反應(yīng)中趨化各種炎癥細胞到損傷部位，參與了炎癥細胞的滾動、黏附和跨內(nèi)皮遷移等一系列過程。許多研究表明，腫瘤轉(zhuǎn)移和炎癥細胞浸潤有著相似的形成過程，如均涉及到細胞滾動、黏附和跨內(nèi)皮遷移等。也有研究報道，腫瘤細胞可以限定性表達某些趨化因子或趨化因子受體，并且存在趨化因子信號途徑異常的狀態(tài)，提示趨化因子或其受體可能通過與炎癥細胞浸潤相似的機制參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移。目前CXCR4SDF1Α參與多種腫瘤如乳腺癌、肺癌、前列腺癌的轉(zhuǎn)移和擴散已見報道。近來的還研究發(fā)現(xiàn)，在有效的免疫應(yīng)答中，SDF1Α不僅能趨化T細胞到次級淋巴器官，而且對T細胞的活化還具有協(xié)同刺激作用。NANKI研究發(fā)現(xiàn)，在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量的記憶性CD4T的集聚，其細胞表面CXCR4的表達水平大大提高，關(guān)節(jié)腔內(nèi)SDF1Α表達水平也大大提高，推測CXCR4SDF1Α的相互作用可能既可以聚集T細胞，而且為可T細胞活化提供一個潛在的協(xié)同刺激信號。盡管目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CXCR4SDF1Α有多種不同的生物學(xué)功能，并且推測它在行使不同的功能時依靠不同的的信號途徑。但是這些功能的的作用機制，信號傳導(dǎo)差異以及影響因素還需要進一步深入研究。本研究旨在通過CXCR4基因轉(zhuǎn)染細胞株作為免疫原免疫小鼠研制獲得鼠抗人CXCR4單克隆抗體，并以抗人CXCR4單抗為材料研究揭示人CXCR4SDF1Α在膠質(zhì)瘤細胞上表達的生物學(xué)意義和對T細胞的協(xié)同刺激作用。一、鼠抗人CXCR4單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性的鑒定目的研制鼠抗人CXCR4單克隆抗體，為探討人CXCR4SDF1Α的生物學(xué)功能及其機制提供必備的物質(zhì)手段。方法利用高表達人CXCR4分子的基因轉(zhuǎn)染細胞株L929CXCR4為免疫原，常規(guī)免疫BALBC小鼠。采用B淋巴細胞雜交瘤融合技術(shù)研制鼠抗人CXCR4單克隆抗體，并以該基因轉(zhuǎn)染細胞L929CXCR4作為陽性篩選細胞，以轉(zhuǎn)空質(zhì)粒的對照細胞L929MOCK作為陰性篩選細胞。經(jīng)間接免疫熒光標記和流式細胞術(shù)分析、反復(fù)篩選和多次克隆化培養(yǎng)，獲得特異分泌鼠抗人CXCR4分子單克隆抗體的雜交瘤細胞株；采用細胞核染色體計數(shù)、IG亞型快速定性試紙法、競爭結(jié)合抑制以及WESTERNBLOT等試驗，對獲得的雜交瘤細胞株及單克隆抗體進行生物學(xué)特性的鑒定；用間接免疫熒光法初步分析單抗對免疫細胞表達CXCR4的識別作用。結(jié)果成功獲得2株持續(xù)、穩(wěn)定分泌鼠抗人CXCR4單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為6H7和7D4。核型分析顯示，雜交瘤細胞株的染色體數(shù)目在100條以上，超過小鼠B細胞和SP20細胞的染色體數(shù)，表明為融合體；經(jīng)過快速定性試紙分析顯示，2株單抗輕鏈均為Κ鏈，6H7重鏈為IGG1亞類，而7D7重鏈為IGG2A；WESTERNBLOT分析結(jié)果顯示，單抗7D4能與CXCR4分子特異性結(jié)合，形成陽性條帶；單抗識別的抗原表位分析結(jié)果表明，單抗6H7和7D4與商品化的鼠抗人CXCR4單抗克隆號12G5識別不同的抗原表位。流式細胞儀檢測結(jié)果表明，單抗6H7和7D4能檢測到PBMCS亞群上CXCR4分子的表達。結(jié)論成功獲得兩株穩(wěn)定分泌特異性鼠抗人CXCR4單抗的雜交瘤細胞株，兩株單抗識別的抗原位點不同，與商品化單抗12G5識別的抗原位點也不同，是兩株新型的抗人CXCR4單克隆抗體。這兩株抗人CXCR4單抗的研制成功為探討CXCR4表達特性、CXCR4SDF1Α多種生物學(xué)功能及其機制提供必備的物質(zhì)手段。二、CXCR4SDF1Α信號促進膠質(zhì)瘤細胞遷移和增殖及其單抗阻斷作用的研究目的利用研制的CXCR4單抗，初步分析了CXCR4在多種腫瘤細胞株和膠質(zhì)瘤組織上的表達，以及探討了CXCR4SDF1Α介導(dǎo)信號在單抗阻斷和非阻斷情況下對膠質(zhì)瘤細胞株U251體外生物物學(xué)行為的影響。方法采用間接免疫熒光標記法分析腫瘤細胞株表面CXCR4分子的表達，用免疫組織化學(xué)法檢測膠質(zhì)瘤組織中CXCR4的表達。MTT法研究了SDF1Α刺激的膠質(zhì)瘤細胞株U251體外增殖及單抗7D4的阻斷作用。用趨化小室分析了CXCR4SDF1Α信號對膠質(zhì)瘤細胞U251的體外遷移作用及單抗的阻斷作用。結(jié)果流式細胞儀分析結(jié)果，顯示大多數(shù)腫瘤細胞株上都表達CXCR4分子，尤其是造血系統(tǒng)來源的腫瘤細胞株CXCR4表達較高，而在上皮源性的腫瘤細胞株M231、MCF7和95D上表達相對偏低。免疫組化的結(jié)果表明，膠質(zhì)瘤組織上檢測到CXCR4的表達。增殖與抗體阻斷實驗結(jié)果表明，SDF1Α能夠刺激U251體外增殖，并且有濃度依賴性；CXCR4特異性的單抗7D4能阻斷SDF1Α的這一激發(fā)作用。遷移實驗結(jié)果顯示單抗7D4也能阻斷SDF1Α誘導(dǎo)的U251細胞的體外遷移作用，表明研制的抗人CXCR4單抗7D4具有阻斷作用。結(jié)論本研究分析并證實了CXCR4在腫瘤細胞株表面的廣泛表達和在膠質(zhì)瘤組織上表達；CXCR4SDF1Α信號能夠作用于膠質(zhì)瘤細胞株的體外生長和轉(zhuǎn)移，推測該信號與膠質(zhì)瘤侵襲性生長有關(guān)。三、CXCR4SDF1Α信號對T細胞協(xié)同刺激及其單抗阻斷作用的研究目的利用所獲得的抗人CXCR4單克隆抗體7D4和重組人SDF1Α，探討CXCR4SDF1Α相互作用對T細胞協(xié)同刺激作用。方法采用熒光單標或雙標記法通過流式細胞術(shù)分析DC誘導(dǎo)成熟過程中細胞表面及PHA活化的CD4、CD8T淋巴細胞上的CXCR4的表達；用激發(fā)型抗人CD3單抗包板，重組人SDF1Α聯(lián)合或不聯(lián)合抗人CD28單抗處理，通過流式細胞術(shù)、MTT法和ELISA法分別測定了SDF1Α對T淋巴細胞活化、增殖及細胞因子分泌的作用；在此基礎(chǔ)上，用激發(fā)型抗人CD3單抗包板，選用特定的SDF1Α濃度和CD28單抗聯(lián)合處理，通過流式細胞術(shù)、MTT法和ELISA法分別測定單抗7D4對T淋巴細胞活化、增殖及細胞因子分泌的影響；結(jié)果PHA活化條件下，CD4T細胞上CXCR4呈上調(diào)性表達，隨后表達有所下降。而在CD8T細胞上沒有明顯的變化；CXCR4分子在單核細胞誘導(dǎo)至MDC過程中，呈現(xiàn)逐步上調(diào)性表達。SDF1Α單獨作用時，并不能明顯促進T細胞的體外增殖、活化和上調(diào)細胞因子的分泌，而與CD28信號協(xié)同作用時，SDF1Α則能促進T細胞的增殖和細胞因子的分泌，并且有一定的劑量依賴性。但是，對T細胞上CD25和CD69的表達無顯著影響。單抗7D4可阻斷SDF1Α對T細胞的協(xié)同刺激作用，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。而且單抗7D4能不同程度地下調(diào)CD4T細胞上CD25和CD69的表達，但對CD8T上的CD25和CD69影響并不明顯。結(jié)論以研制獲得的抗人CXCR4單抗7D4和重組人SDF1Α為手段，揭示了CXCR4在免疫細胞上的調(diào)節(jié)性表達。同時，CXCR4SDF1Α信號在與CD28信號共同作用時，對T細胞的活化具有協(xié)同刺激作用，單抗7D4能抑制SDF1Α的協(xié)同刺激作用。綜上所述，本研究成功獲得了兩株穩(wěn)定分泌特異性鼠抗人CXCR4單抗的雜交瘤細胞株，進一步對單抗的生物學(xué)特性進行了鑒定。在此基礎(chǔ)上分析了PBMCS亞群上CXCR4的表達譜。通過對腫瘤表面CXCR4表達的檢測和在膠質(zhì)瘤細胞株上的功能分析，證實了CXCR4是腫瘤組織中廣泛表達的分子，并且對膠質(zhì)瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移都有一定的作用。同時還發(fā)現(xiàn)CXCR4SDF1Α信號在與CD28聯(lián)合作用時，對T細胞的活化具有一定的協(xié)同刺激作用，研制的抗體對SDF1Α的協(xié)同刺激作用呈現(xiàn)出阻斷效應(yīng)。

簡介：廣西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文腹腔鏡CO氣腹對宮頸癌細胞生物學(xué)行為的影響姓名林飛申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腫瘤麻醉學(xué)指導(dǎo)教師潘靈輝20080101廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴謹?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，不包含本人或他人已申請學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了致謝。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切責(zé)任。論文作者簽名研伊廣西醫(yī)科大學(xué)保護知識產(chǎn)權(quán)說明本人完全了解廣西醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在校攻讀學(xué)位期間，博士后工作人員、人才小高地工作人員在校工作期間，論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬廣西醫(yī)科大學(xué)。本人保證在校期間和離校后，發(fā)表或使用論文工作成果時署名第一作者單位均為廣西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留論文，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。論文作者簽名幸乖匹指導(dǎo)教師簽名弋靄P諺曳嗍洲_1＼

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細胞低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細胞生物學(xué)行為的實驗研究生物學(xué)行為的實驗研究（題名和副題名）冀堃（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名楊富生教授金巖教授指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院兒童口腔科第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院組織病理學(xué)教研室申請學(xué)位級別碩士專業(yè)名稱口腔臨床醫(yī)學(xué)（兒牙）論文提交日期201004答辯日期201005論文起止時間2008年06月至2010年04月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細胞低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細胞生物學(xué)行為的實驗研究生物學(xué)行為的實驗研究研究生冀堃學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)（兒童口腔醫(yī)學(xué)）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院兒童口腔科導(dǎo)師楊富生教授（主任醫(yī)師）金巖教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師軒昆副教授（副主任醫(yī)師）資助基金項目資助基金項目1國家自然科學(xué)基金（NO30600709）2省自然科學(xué)基金社發(fā)公關(guān)項目2006K11G1（2）關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞低堿性磷酸酯酶癥；堿性磷酸酯酶；乳牙牙周膜干細胞中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2010年5月

簡介：分類號R322密級單位代碼10422學(xué)號200712727◎厶茹辦署碩士學(xué)位論文HANDONGUNIVERSITYMASTERSTHESIS論文題目PTEN表達下調(diào)對乳腺癌細胞生物學(xué)性狀的影響THEINFLUENCEOFPTENDECENTONBIOLOGICALABILITY作專導(dǎo)OFBREASTCANCERCELL合作導(dǎo)師2010年5月20日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要?????????????????????????????3英文摘要?????????????????????????????5符號說明?????????????????????????????7論文正文前言?????????????????????????????8日Ⅱ舌．．．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8實驗材料??????????????????????????1L實驗方法??????????????????????????15實驗結(jié)果?????????????????????????19討論?????????????????????????????22結(jié)論?????????????????????????????25參考文獻???????????????????????????26IJF；|圖???????????????????????????????3L綜J丕???????????????????????????．34致{射???????????????????????????????51發(fā)表論文????????????????????????52

簡介：Z793269學(xué)校代碼10023學(xué)號200201005抗髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體生物學(xué)特性研究姓名張遙北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2002級導(dǎo)師崔麗英教授指導(dǎo)老師徐雁副教授北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院神經(jīng)內(nèi)科完成日期二零一零年六月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文縮寫英文縮略詞及注釋英文全稱中文全稱APCCMSEAEEDSSELISAHCLCAMLLIND臌譬1MBPMHC1IAMTIGENPRESEMINGCELLCL舔SICMULTIPLESCLEROSISEXPERIMENTALAUTOIINMUNEENCEPHALONLYELITISEXPAILDEDDISABIL時STANLSSCALEEN巧MELINKEDIMM蚰OSORBENTASSAYHEALTHYCON仃OLINTERCELLULARADHESIONMOLECULEINTE訂EUKIILILLFLAI砌ATODRNEUROLOGICALDISEASESINTERFERONYMYELILLBASICPROTEINM勾ORHISTOCOMPATIBILI鑼COMPLEXCLASSILMOGMYELINOLI90DENDROCYTEGLYCOPROTEILL抗原呈遞細胞經(jīng)典型多發(fā)性硬化實驗性自身免疫性腦脊髓炎擴展殘疾狀態(tài)評分酶聯(lián)免疫吸附實驗健康對照細胞間粘附分子白介素炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病T干擾素髓鞘堿性蛋白主要組織相容性復(fù)合體髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白MSMULTIPLESCLEROSIS多發(fā)性硬化N1VIONEUROMYELITISOPTICA視神經(jīng)脊髓炎01心M0CLLERNONI11NAMMATO巧NEWOLOGICALDISEASES其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病OSMSOPTICOSPIMLMULTIPLESCLEROSISOSPOLIGODENDROCYTESPECIFICPROTEIILPLPP10TEOLIPIDPMTEINVCAM、協(xié)CULARCELLADHESIONMOLECULEVEPⅥSUALEVOKEDPOTENTIAL2視神經(jīng)脊髓型多發(fā)性硬化少突膠質(zhì)細胞特異性蛋白蛋白脂質(zhì)蛋白血管細胞粘附分子視覺誘發(fā)電位

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文異氟醚對人口腔癌細胞系生物學(xué)特性異氟醚對人口腔癌細胞系生物學(xué)特性影響的實驗研究影響的實驗研究（題名和副題名）任軍（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名徐禮鮮教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院麻醉科申請學(xué)位級別博士專業(yè)名稱麻醉學(xué)論文提交日期201104答辯日期201105論文起止時間2009年03月至2011年04月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)異氟醚對人口腔癌細胞系生物學(xué)特性異氟醚對人口腔癌細胞系生物學(xué)特性影響的實驗研究影響的實驗研究研究生生任軍學(xué)科專業(yè)麻醉學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院麻醉科導(dǎo)師徐禮鮮教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師張惠副教授副主任醫(yī)師資助基金項目資助基金項目國家自然科學(xué)基金資助項目（81070997）關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞吸入麻醉藥；異氟醚；細胞增殖；凋亡；TCA8113細胞；HSC2細胞；侵襲；流式細胞術(shù)；蛋白質(zhì)印跡中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2011年4月

簡介：目的觀察內(nèi)皮祖細胞EPC在不同濃度血管內(nèi)皮生長因子VEGF作用下的生物學(xué)特性探討VEGF對EPC生物學(xué)特性的影響。方法無菌條件下分離脛骨和股骨M199培養(yǎng)液沖洗骨髓腔收集沖洗液充分吹打混勻加入裝有密度梯度為1077GCM3的淋巴細胞分離液的離心管沖洗液與分離液的體積比為2∶1。20℃下2000RMINFICOLLHISTOPAQUE梯度離心沉淀20MIN。吸取中間乳白色云霧狀單個核細胞層PBS沖洗細胞沉淀。以1106ML的密度接種到100ML培養(yǎng)瓶中。含20％胎牛血清的M199培養(yǎng)基37℃、5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48H后重新接種未貼壁細胞。第3天半量換液第5天全量換液。細胞達到80％以上融合時用025％胰酶含1％EDTA消化細胞。在第7天運用流式細胞儀行細胞表型CD133、CD34鑒定。收集貼壁細胞并計數(shù)將等量EPC懸液200ΜL接種到96孔培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)2D用不含胎牛血清的M199培養(yǎng)液培養(yǎng)24H后換含有不同濃度0、10、50NGMLVEGF的培養(yǎng)液每個濃度組重復(fù)5孔培養(yǎng)24H后每孔加MTT5GL20ΜL繼續(xù)培養(yǎng)4H后吸棄上清液再加入DMSO150ΜL孔水平振蕩10MIN后置于酶標儀波長560NM處取5個孔吸光值OPTICALDENSITYOD的平均值得到最適濃度。以最適濃度按上述方法培養(yǎng)以培養(yǎng)時間為橫坐標、OD值為縱坐標繪制細胞生長曲線。應(yīng)用24孔的TRANSWELL孔徑8ΜM小室行體外遷移實驗。上室為200ΜLEPC1104ML懸液下室為含不同濃度0、10、50NGMLVEGF的M199培養(yǎng)液。37℃下培養(yǎng)24H將上室附著細胞用濕棉簽擦去固定GIEMSA染色脫色拍照200實驗重復(fù)3次。倒置顯微鏡計數(shù)遷移細胞。體外血管生成能力檢測應(yīng)用纖維蛋白凝膠行體外血管生成實驗。96孔培養(yǎng)板每孔依次加30ΜL人纖維蛋白原與20ΜL凝血酶晃勻37℃30MIN成凝膠加入5103細胞懸液培養(yǎng)過夜去除培養(yǎng)液依次加30ΜL人纖維蛋白原與20ΜL凝血酶晃勻加100ΜL培養(yǎng)液24H。顯微鏡觀察血管生成隨機選取3個視野200計數(shù)血管數(shù)目。原代細胞培養(yǎng)至第4天時換用含不同濃度10和50NGMLVEGF的M199培養(yǎng)液培養(yǎng)1D后運用流式細胞儀進行檢測。將貼壁細胞用胰酶消化后PBS反復(fù)吹打制成單細胞懸液2000RMIN離心5MIN將細胞置于50ΜLPBS中制成單細胞懸液。加入CD31直標抗體4℃孵育60MIN。PBS洗滌重懸后立即在避光條件下進行流式細胞檢測計數(shù)1104個細胞。同型對照一抗為PBS其余操作同上。統(tǒng)計CD31細胞的百分率應(yīng)用WINMDI29軟件進行分析。結(jié)果培養(yǎng)7D的細胞CD133和CD34陽性率分別為6944％和810596。MTT實驗顯示10NGML組細胞的OD值明顯大于0NGML組和50NGML組0NGML組的OD值明顯大于50NGML組P＜005遷移實驗、體外血管形成實驗及誘導(dǎo)分化實驗顯示50NGML組和10NGML組較0NGML組更能促進EPC的遷移、體外血管形成及誘導(dǎo)分化且50NGML組強于10NGML組P＜005。結(jié)論VEGF能夠提高EPC遷移能力、體外血管形成能力及促進誘導(dǎo)分化且隨著VEGF濃度的升高而增強。VEGF能夠提高EPC增殖能力但隨著濃度的升高而減弱。

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文惡性骨腫瘤側(cè)群（SP）細胞的分離，鑒定及生物學(xué)特性研究（題名和副題名）楊旻（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名羅卓荊教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科申請學(xué)位級別博士專業(yè)名稱外科學(xué)（骨外）論文提交日期201004答辯日期201005論文起止時間2007年9月至2010年3月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)惡性骨腫瘤側(cè)群（惡性骨腫瘤側(cè)群（SP）細胞的分離，鑒定）細胞的分離，鑒定及生物學(xué)特性研究及生物學(xué)特性研究研究生楊旻學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（骨外）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科導(dǎo)師羅卓荊教授（主任醫(yī)師）資助基金項目資助基金項目973課題2009CB5217052009CB521705關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞惡性骨腫瘤；腫瘤干細胞；SP細胞中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2010年5月

簡介：共焦熒光顯微術(shù)和全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)在分子生物學(xué)、分子化學(xué)及納米材料等領(lǐng)域受到了廣泛關(guān)注。本文就這兩種技術(shù)在生物活體細胞中的應(yīng)用進行了探索。首先，利用激光掃描共焦顯微鏡，將一種新的汞離子探針運用于對活體細胞中微量汞離子的檢測。當探針在水溶液中與汞離子發(fā)生反應(yīng)以后，它的熒光光譜將會產(chǎn)生約50NM的藍移。這個探針具有很高的靈敏度和離子選擇性，并且不會受到PH的影響。在水溶液中，無論是單光子或雙光子激發(fā)，探針的探測極限可以達到PPB水平。用這種探針探測纖細裸藻細胞EUGLENAGRACILIS277中的汞離子時，可以觀察到熒光峰會有大約3235NM的藍移，這個位移較溶液中要小，可能是細胞中復(fù)雜的環(huán)境所帶來的的溶劑效應(yīng)引起的。然而，在細胞中當探針或汞離子濃度很低時，由于熒光信號較弱，它的單光子光譜會受到細胞的自體熒光的干擾。但是因為探針的雙光子吸收截面比自體熒光物質(zhì)的高很多，所以其雙光子光譜仍然具有很好的信噪比。另一方面，利用全內(nèi)反射顯微鏡在單分子條件下，研究中性PH溶液中的牛血清白蛋白BSA在石英表面的吸附作用。從結(jié)果可以看出993％的BSA分子是沒有粘性的，即使能夠吸附，也會很快解吸附。相反另外07％的BSA具有很大的粘性。這種異質(zhì)性是集合平均無法測量到的。我們根據(jù)單分子的測量結(jié)果，建立了一種新的BSA表面吸附的動力學(xué)模型。為了通過調(diào)節(jié)BSA的環(huán)境條件來有效地控制其在石英表面的吸附，因而研究了BSA分子在不同PH值下的狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同PH值下，BSA分子的吸附會發(fā)生變化，所以可以通過調(diào)節(jié)PH值來改變其吸附狀態(tài)。但是這些改變并不是很明顯，因此我們又利用溶劑效應(yīng)來更有效的控制其吸附。在乙醇溶劑中，常規(guī)BSA分子會大量的轉(zhuǎn)變?yōu)檎承苑肿?。因此，只要能夠控制溶液中乙醇的濃度，我們就可以很有效的控制BSA分子在石英表面的吸附。

簡介：肝功能衰竭是各種嚴重肝病的終末期表現(xiàn)，是威脅人類健康的重要原因之一，雖然原位肝移植是目前治療肝細胞衰竭的最有效手段，但卻受到捐獻器官短缺和手術(shù)費用較高的限制，而建立有效的人工肝治療，一方面可以為尋求合適的肝移植供體提供時間，另一方面可以為肝細胞再生爭取時間。目前各種物理型人工肝輔助治療系統(tǒng)雖然有不錯的療效，但仍無法替代肝臟的各種復(fù)雜生物學(xué)功能。隨著細胞生物學(xué)和組織工程學(xué)的發(fā)展，體外生物人工肝支持系統(tǒng)EXTRACPEALBIOARTIFICIALLIVERSUPPTSYSTEM，EBLSS在肝功能衰竭治療方面的應(yīng)用，正日益受到人們的關(guān)注。原代人肝細胞無疑是體外生物人工肝支持系統(tǒng)的治療最為理想的肝細胞來源，但原代人肝細胞，增殖傳代極為困難；動物源性肝細胞雖可大量獲得，卻有著極大的風(fēng)險，包括使病人出現(xiàn)人畜共患疾病如使用豬肝細胞治療有潛在的感染豬內(nèi)生逆轉(zhuǎn)錄病毒的可能以及異種蛋白進入病人體內(nèi)導(dǎo)致免疫反應(yīng)等風(fēng)險，因此合適的肝細胞來源問題仍是制約生物人工肝發(fā)展的一個瓶頸問題。目前，通過永生化的方法設(shè)計建立能無限增殖并具有良好生物代謝功能的人源性肝細胞系是解決肝細胞來源問題的主要研究方向之一。本課題通過將HTERT基因?qū)氤扇烁渭毎鸋L7702，構(gòu)建了永生化成人肝細胞系PLNHL7702，并且對導(dǎo)入HTERT基因前后兩種細胞的形態(tài)、增殖狀況、生物學(xué)功能進行了比較和研究，對新建永生化成人肝細胞系PLNHL7702致瘤性問題進行了初步研究，以期為進一步研究解決生物人工肝細胞來源問題奠定試驗基礎(chǔ)。研究將攜帶有HTERT基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入成人肝細胞HL7702，通過RTPCR，WESTERNBLOT，和IEA間接免疫熒光法在基因和蛋白水平對所建細胞系PLNHL7702進行了鑒定；在倒置相差顯微鏡和透射電鏡下觀察并比較了基因?qū)肭昂蠹毎男螒B(tài)及超微結(jié)構(gòu)；采用MTT染色法檢測在基因?qū)肭昂蟾渭毎脑鲋衬芰ψ兓B續(xù)觀察并描繪生長曲線；采用RTPCR法檢測基因?qū)肭昂蟾渭毎δ芑虮磉_情況；采用WESTERNBLOT檢測基因?qū)肭昂蟾渭毎毎豍450的表達；并通過軟瓊脂實驗、裸鼠致瘤性實驗對所建細胞系PLNHL7702的致瘤性進行了初步分析。結(jié)果1RTPCR、WESTERNBOLT和IEA可檢測到HTERT基因在肝細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和表達，可檢測到相關(guān)蛋白；2光鏡和電鏡觀察細胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)基因?qū)肭昂蟾渭毎牟町悾?細胞增殖實驗表明細胞在導(dǎo)入基因后增殖能力有了明顯的提高；4肝細胞功能基因的轉(zhuǎn)錄在轉(zhuǎn)染前后均可檢測到；5基因?qū)肭昂蠹毎锨宓臋z測表明肝細胞的一般生化功能未受影響；6基因?qū)肭昂蟾渭毎ㄟ^WESTERNBOLT均可檢測到細胞色素P450的表達；7。軟瓊脂實驗、裸鼠致瘤性實驗未提示PLNHL7702有致瘤性表現(xiàn)。討論本研究成功建立永生化成人肝細胞系PLNHL7702，其體外增殖能力較原細胞系HL7702明顯提高，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能方面與基因?qū)肭盁o明顯差異，并可檢測到細胞色素P450的表達，初步致瘤性分析未發(fā)現(xiàn)細胞有致瘤性，提示該細胞系進一步研究后有可能為生物人工肝的治療提供一種安全有效的肝細胞來源。