殼聚糖脂復合物納米微粒的構建及其生物學效應.pdf

1、本論文制備了亞油酸修飾殼聚糖(LACH)、脫氧膽酸修飾殼聚糖(DACH)兩種殼聚糖脂復合物,并檢測了合成的復合物的細胞毒性:利用L,ACH制備出納米微粒,分析了該種納米微粒對成纖維細胞及腫瘤細胞系的細胞毒性,為納米微粒的進一步應用提供了基礎研究。 利用EDC介導反應合成DACH、LACH殼聚糖脂復合物,紅外光譜及核磁共振譜檢測證明了產物的結構,且產物的取代度不受殼聚糖分子量的影響。通過紅細胞溶血試驗和MTT檢驗測定了LACH、D

2、ACH的細胞毒性。結果表明,各個LACH、DACH樣品在固態(tài)下不會引起紅細胞溶血,然而在溶液狀態(tài)下對紅細胞的毒性作用卻不容忽視。兩種殼聚糖脂復合物在不同濃度下對胎鼠皮膚成纖維細胞均未表現出細胞毒性,且不受樣品分子量和作用時間的影響。相比于原材料殼聚糖對成纖維細胞增殖的抑制作用,LACH、DACH細胞相容性改善的原因是多方面的。 通過熒光探針實驗、激光粒度散射儀、透射電鏡觀察檢測了LACH納米微粒的成球性質,結果表明材料在濃度高于

3、0.1g/l時即表現出成球趨勢,且隨著濃度增大成球趨勢愈加明顯;形成的絕大多數微粒的粒徑在200nm左右,且呈球形,形態(tài)完整。通過紅細胞溶血試驗和MTT檢驗測定了LACH納米微粒的細胞毒性。 結果表明,LACH溶液的溶血性顯著高于LACH納米微粒懸液,且二者在酸性環(huán)境下均表現出濃度、時間依賴性的紅細胞毒性作用;納米微粒在中性培養(yǎng)液中可認為對胎鼠皮膚成纖維細胞無毒的,但在pH=6.5的培養(yǎng)液中則表現出時間、濃度依賴性的毒性作用。納

4、米微粒所表現出的毒性作用主要與酸性環(huán)境下初級氨基的質子化有關。 本論文還通過MTT檢驗測定了LACH溶液及納米微粒懸液對腫瘤細胞系的毒性。結果表明,14cpLACH溶液在濃度超過60μg/ml時即會對Hela細胞產生顯著毒性,但對HT29細胞作用不顯著;小分子量的LACH樣品溶液對Hela細胞毒性要顯著高于大分子量樣品溶液；14cp LACH納米微粒作用3-5d時，濃度為1000μg/ml的樣品會對Hela細胞產生顯著毒性；載藥

5、納米微粒中的阿霉素(ADR)在作用時間為1d時只有部分釋放；3d時，載藥納米微粒中的ADR較第1d時加速釋放，但仍有部分ADR未釋放；5d時，載藥納米微粒中的ADR基本全部釋放，表現出類似于游離ADR的作用效果，因此可知載藥納米微粒相對于游離阿霉素釋藥速度明顯變緩。然而作用時間為ld和3d時，ADR濃度較低的載藥納米微粒組和游離ADR組能顯著促進tela細胞的增殖，空白納米微粒不會促進Hela細胞增殖，這種促進作用可能是由低濃度ADR表