透明質(zhì)酸改性殼聚糖作靶向基因載體研究.pdf

1、基因治療為治愈遺傳疾病提供了一種有效手段，已成為近二十年來生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一個熱點?；蛑委煹囊粋€關(guān)鍵步驟是：開發(fā)安全而有效的基因載體。傳統(tǒng)上，基因載體可分為兩大類：病毒型基因載體和非病毒型基因載體。病毒型基因載體具有轉(zhuǎn)染效率高的優(yōu)勢，但由于安全性問題，如免疫原性和潛在的致癌性，使其臨床應(yīng)用受到很大限制。正因為如此，非病毒型基因載體，特別是陽離子聚合物載體，受到越來越多的關(guān)注。其中，殼聚糖因其良好的生物相容性和生物可降解性，已成為一種

2、最具吸引力的潛在基因載體。 然而，有兩個缺陷限制了殼聚糖基因載體的應(yīng)用范圍：一是殼聚糖水溶性差，二是殼聚糖基因載體轉(zhuǎn)染效率低。為了克服這些障礙，本論文將酶切后的透明質(zhì)酸作為靶向配體，共價偶聯(lián)到不同分子量的殼聚糖的氨基上，以此構(gòu)建靶向殼聚糖基因載體。親水性分子透明質(zhì)酸的引入，使殼聚糖的水溶性明顯得到了改善。所合成的透明質(zhì)酸修飾的殼聚糖，可通過靜電自組裝同質(zhì)粒DNA形成核/殼結(jié)構(gòu)的納米顆粒，其直徑均小于100I吼。經(jīng)過載體的包覆，質(zhì)

3、粒 DNA 具備良好的核酸酶抗性。MTT 實驗證明，載體對昆蟲細(xì)胞Sf9沒有任何細(xì)胞毒性。和未經(jīng)修飾的殼聚糖相比，改性后的殼聚糖基因載體對昆蟲細(xì)胞Sf9的轉(zhuǎn)染效率大幅提高。以家蠶作為模式動物，測試載體的活體轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白基因均能有效表達(dá)，最高轉(zhuǎn)染效率超過50％。離體及活體轉(zhuǎn)染結(jié)果均說明透明質(zhì)酸作為靶向配體，能有效提高基因的轉(zhuǎn)染效率。所得改性殼聚糖對其它細(xì)胞的毒性和轉(zhuǎn)染效率的研究正在進(jìn)行之中。 此外，

4、本論文還研究了殼聚糖的分子量及載體/質(zhì)粒的質(zhì)量比對基因轉(zhuǎn)染效率的影響。離體及活體轉(zhuǎn)染實驗均表明，最適用于基因轉(zhuǎn)染的是載體2(ZT2)，載體2/質(zhì)粒的最佳質(zhì)量比為12/1。這些研究結(jié)果均表明，透明質(zhì)酸修飾的殼聚糖，是一種很有潛力的基因載體。 最后，為探討基因轉(zhuǎn)染機(jī)理，本論文還用CdTe量子點對載體進(jìn)行了標(biāo)記，確定了載體與量子點相互作用的最佳配比為6×10<'-3>(載體溶液與量子點溶液的體積比)。這為進(jìn)一步標(biāo)記載體/基因復(fù)合物，進(jìn)