毛細管電泳中涂層技術及間接激光誘導熒光檢測的研究與應用.pdf

1、高效毛細管電泳(high performance capillary electrophoresis，HPCE)是20世紀80年代初發(fā)展起來的新型分離分析技術，具有分離效率高、速度快、靈敏度高、所需樣品少、成本低、抗污染能力強等特點。毛細管電泳的理論和應用研究是分析化學最活躍的領域之一，尤其對于大生物聚合物的分離測定，是一項強有力的分析技術，并廣泛應用于人類基因組的測序當中。但是，一個背受關注的問題是如何降低此類大生物聚合物在毛細管中的

2、吸附。涂層技術在毛細管電泳中的應用，在降低蛋白質吸附問題上獲得了較好的效果，從而被廣泛的使用。此外，激光誘導熒光檢測器具有很高的靈敏度，可以適應毛細管電泳不同模式的檢測，已成為藥物分析和生命科學領域的一種重要的分析檢測技術。因此，本文用毛細管電泳-激光誘導熒光檢測進行研究并提出了分離分析的新體系。 該論文在綜述前人工作的基礎上，開展了如下未見文獻報道的創(chuàng)新性的研究工作： 1.以CDDS為涂層試劑，通過AFM顯微鏡考察了模

3、擬熔融硅石英板上的CDDS涂層，并通過對模型化合物-氨基酸的分析與測定，進一步研究了CDDS涂層的性質： 2.以CDDS為毛細管涂層試劑，建立了測定麻黃堿和偽麻黃堿的膠束電動色譜-激光誘導熒光(MEKC-LIF)快速靈敏分析新方法； 3.建立了同時測定人血清中表阿霉素、柔紅霉素和去甲氧基柔紅霉素的MEKC-LIF方法，并定量測定了癌癥病人血清中的表阿霉素和柔紅霉素； 4.使用熒光素鈉作為背景熒光試劑，建立了同時分

4、析測定苦參堿、槐定堿和槐果堿的毛細管區(qū)帶電泳-間接激光誘導熒光檢測新方法，擴大了激光誘導熒光檢測的應用范圍，對難衍生化合物的分離分析提供了一種新思路和新途徑； 5.以熒光素鈉作為背景熒光試劑，建立了一種用于同時測定草豆蔻中山姜素和小豆蔻明含量的膠束電動色譜一間接激光誘導熒光檢測新方法. 論文共分為六章： 第一章：對毛細管電泳中涂層技術的研究進展進行了較為全面綜述，重點綜述了近年出現的永久涂層、半永久涂層和動態(tài)涂層

5、的發(fā)展趨勢和應用。 第二章：以CDDS為涂層試劑，通過AFM顯微鏡和紅外光譜儀考察了模擬熔融硅石英板上的CDDS涂層，并通過對模型化合物-氨基酸的分析與測定，進一步研究了CDDS涂層的穩(wěn)定性。在最優(yōu)的緩沖溶液條件下，5.5 min內分離和測定了9種氨基酸，遷移時間的相對標準偏差分別小于0.97％。 第三章：在第二章的基礎上，以CDDS為涂層試劑，建立了測定麻黃堿和偽麻黃堿的膠束電動色譜.激光誘導熒光(MEKC-LIF)快

6、速靈敏分析新方法。在最佳條件下，4 min內可實現基線分離，靈敏度高，重現性好。 第四章：建立了同時測定人血清中表阿霉素、柔紅霉素和去甲氧基柔紅霉素的MEKC-LIF方法。該方法簡單，靈敏度高，可用于癌癥病人血清中的這三種抗生素的分析，得到的回收率范圍在95.7-100.2％。 第五章：建立了一種毛細管區(qū)帶電泳-間接激光誘導熒光檢測法同時測定苦參堿、槐定堿和槐果堿的毛細管區(qū)帶電泳-間接激光誘導熒光檢測新方法，擴大了LIF