酪氨酸酶催化反應(yīng)及其應(yīng)用研究.pdf

1、該論文基于酪氨酸酶催化單酚發(fā)生的氧化-邁克爾加成反應(yīng)機(jī)理,結(jié)合酪氨酸酶在水溶液、水不互溶有機(jī)溶劑和無溶劑三個體系的催化反應(yīng),做了以下的研究和應(yīng)用:1.研究了酪氨酸酶催化羥基吡啶類化合物的氧化反應(yīng)及生物學(xué)意義.結(jié)果表明,2-羥基吡啶、4-羥基吡啶不能被酪氨酸酶氧化,也不是酪氨酸酶的抑制劑.酪氨酸酶可以催化2,3-二羥基吡啶的氧化,氧化過程表現(xiàn)出單酚化合物的延遲期行為,說明羥基吡啶類化合物在反應(yīng)條件下主要以酮式結(jié)構(gòu)存在.2,3-二羥基吡啶氧

2、化產(chǎn)物可以抑制乳酸脫氫酶活力,機(jī)理是氧化-邁克爾加成.2.在無溶劑體系中,酪氨酸酶可以快速催化對位取代苯酚和芳香胺的氧化-邁克爾加成反應(yīng).載體含量、水含量、酶含量和反應(yīng)時間對反應(yīng)速度有影響,其中水含量影響較大.對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析,4-苯氧基苯酚、4-芐基苯酚和4-芐氧基苯酚在酪氨酸酶和芳香胺作用下得到了相同的三取代胺的主產(chǎn)物3-1,4-苯基苯酚得到了兩個吩嗪環(huán)主產(chǎn)物3-4和3-5.3.采用固定化酶在有機(jī)溶劑中催化了對位取代苯酚和芳香

3、胺的反應(yīng),得到相同類型的三個胺取代產(chǎn)物4-1、4-2、4-3,取代基從醌環(huán)上脫落.基于該反應(yīng)機(jī)理,設(shè)計了酪氨酸酶的三個前藥模型化合物并進(jìn)行了體外模型實驗,即以酪氨酸酶的底物苯酚和鄰氨基苯酚作為藥物布洛芬和5-氟脲嘧啶的載體,經(jīng)酪氨酸酶和親核試劑的作用,實現(xiàn)藥物的釋放.結(jié)果表明,前藥模型化合物4-5和4-8可以釋放藥物,化合物4-12還在研究中.4.對合成的化合物進(jìn)行了乙酰膽堿酯酶的抑制活性測定,結(jié)果表明:3-4(IC<,50>=103.