SPR生物傳感器用于檢測(cè)吲哚乙酸和脫落酸.pdf

1、3-吲哚乙酸（IAA）和脫落酸（ABA）是普遍存在的植物激素，在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著重要的作用。IAA最基本的功能不但可以加速和調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育，而且還可以阻礙植物的生長(zhǎng)和根、莖、組織建成的作用。ABA的基本作用是促進(jìn)和抑制植物生長(zhǎng)，促進(jìn)葉子與果實(shí)的脫落，影響花期等作用。目前這兩種植物激素的檢測(cè)方法大都存在樣品前處理復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，成本高，重現(xiàn)性和選擇性差等缺點(diǎn)。因此，本研究采用了具有實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、樣品無(wú)需預(yù)處理、快速靈敏檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)的表面等

2、離子體共振（SPR）生物傳感器檢測(cè)IAA和ABA這兩種植物激素。為了提高SPR傳感器的靈敏度，本文采用兩種方法：一種是將金/銀合金納米粒子作為敏化材料引入SPR生物傳感器中，另一種是通過(guò)加長(zhǎng)檢測(cè)鏈的方式來(lái)提高SPR生物傳感器檢測(cè)的靈敏度。本文包括以下兩部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：
　　（1）兩種SPR生物傳感器的構(gòu)建以及對(duì)IAA的檢測(cè)：一種是傳統(tǒng)模式SPR生物傳感器（傳感器1），另一種是引入Au/Ag合金納米粒子作為增敏材料的SPR生物傳感器（

3、傳感器2）。首先用不同的物質(zhì)修飾SPR的芯片。傳感器1：先在裸金片上修飾MPA，再修飾蛋白A，蛋白A能與MPA末端的被EDC/NHS活化后的羧基結(jié)合使蛋白A修飾到芯片上，用鹽酸乙醇胺對(duì)芯片進(jìn)行滅活，IAA抗體的非抗原結(jié)合位點(diǎn)能與蛋白A結(jié)合使IAA抗體修飾到芯片上，最后進(jìn)行對(duì)IAA的檢測(cè)。傳感器2：先在裸金片上修飾HDT， Au/Ag合金納米粒子可與金硫鍵、金銀鍵結(jié)合從而使其修飾到芯片上，接下來(lái)在傳感器2上依次修飾MPA、蛋白A、IAA抗

4、體的方法與傳感器1相同。結(jié)果兩種傳感器均能成功的檢測(cè)IAA，傳感器1對(duì)IAA濃度為175~350μg/L所對(duì)應(yīng)的波數(shù)變化進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得到線(xiàn)性方程為y=-6.58+0.103 x，R2=0.994，檢測(cè)限為25μg/L（S/N=3）；傳感器2對(duì)IAA濃度為17.5~250μg/L所對(duì)應(yīng)的波數(shù)變化進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得到線(xiàn)性方程為y=4.27+0.104 x，R2=0.999，檢測(cè)限為2.2μg/L（S/N=3）。說(shuō)明傳感器2中引入Au

5、/Ag合金納米粒子確實(shí)可以有效的提高檢測(cè)的靈敏度，此外本實(shí)驗(yàn)所構(gòu)建的SPR生物傳感器具有良好的穩(wěn)定性，特異性及重現(xiàn)性。
　　（2）構(gòu)建兩種SPR生物傳感器并成功檢測(cè)ABA：一種是MPA構(gòu)建的SPR生物傳感器（傳感器1），另一種是巰基己酸構(gòu)建的SPR生物傳感器（傳感器2）。通過(guò)分子自組裝技術(shù)對(duì)SPR生物傳感器的芯片進(jìn)行修飾。傳感器1依次修飾HDT、Au/Ag合金納米粒子、MPA、蛋白A、IAA抗體，最后對(duì)ABA進(jìn)行檢測(cè)。傳感器2與傳

6、感器1的不同之處在于將傳感器1的MPA換成了巰基己酸，增長(zhǎng)了3個(gè)碳鏈，通過(guò)加長(zhǎng)檢測(cè)鏈的方法來(lái)提高 SPR生物傳感器的靈敏度。結(jié)果兩種 SPR生物傳感器均能成功的檢測(cè)ABA，傳感器1對(duì)ABA濃度為13.1~23.8μg/L所對(duì)應(yīng)的波數(shù)變化進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得線(xiàn)性方程為y=1.29+0.074 x，R2=0.995，檢測(cè)限為2.3μg/L（S/N=3）；傳感器2對(duì)ABA濃度為3.3~40μg/L所對(duì)應(yīng)的波數(shù)變化進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得線(xiàn)性方程為