氟甲喹免疫層析試紙條的研究.pdf

1、本論文選擇氟甲喹(FLU)作為目標(biāo)物，制備能夠特異性識(shí)別氟甲喹的多克隆抗體，建立氟甲喹的膠體金標(biāo)記免疫層析分析方法和膠體碳標(biāo)記免疫層析分析方法;并應(yīng)用于動(dòng)物源性食品中氟甲喹殘留的可視化檢測。在此基礎(chǔ)上建立膠體金和膠體碳標(biāo)記的多殘留免疫層析分析方法。
　　采用碳二亞胺法和混合酸酐法分別制備免疫原FLU-BSA和FLU-KLH，免疫新西蘭大白兔獲得抗氟甲喹多克隆抗體。經(jīng)抗血清效價(jià)及抑制率的比較，最終選擇FLU-BSA為免疫原免疫的1號(hào)

2、兔產(chǎn)生的抗血清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，抗血清效價(jià)為1∶256000。優(yōu)化條件，建立間接競爭ELISA方法，靈敏度IC50值為10.9±2.62μg/L;檢出限IC15值為0.79±0.33μg/L。
　　建立氟甲喹膠體金標(biāo)記免疫層析分析方法。膠體金顆粒的粒徑為20nm;金標(biāo)抗體連接的最佳pH值為8.5、最適抗體量為20μg/mL;捕獲抗體的包被濃度為0.5mg/mL，二抗1∶200倍稀釋，選擇MillliporeHF135s硝酸纖維膜作為固

3、相載體，金標(biāo)抗體1∶10稀釋噴涂到金標(biāo)墊上;在最優(yōu)條件下組裝試紙條，將金標(biāo)抗體鋪在結(jié)合釋放墊上的組裝方式其方法檢測限為20μg/L;選擇雞肉、牛肉、豬肉、魚肉、蝦肉、豬肝和牛奶7種實(shí)際樣品進(jìn)行添加實(shí)驗(yàn)，樣品檢測限為50μg/L。
　　建立氟甲喹膠體碳標(biāo)記免疫層析分析方法。將碳標(biāo)抗體鋪在結(jié)合釋放墊上不可行;將碳標(biāo)抗體在溶液狀態(tài)下與標(biāo)準(zhǔn)品混合上樣方法，在最優(yōu)條件下組裝試紙條，檢測限為20μg/L。選擇雞肉、牛肉、豬肉、、魚肉、蝦肉、豬