基于表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)的免疫檢測研究.pdf

1、表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)免疫檢測技術(shù)是借助金屬納米顆粒的表面增強(qiáng)特性，利用SERS的超靈敏度和光譜選擇性，結(jié)合抗體/抗原的特異性吸附作用，發(fā)展起來的一種新型免疫分析技術(shù)。該技術(shù)通常采用“三明治”夾心式免疫結(jié)構(gòu)，即將抗體固定在基片表面(即制作免疫基底)，然后用免疫基底特異性地捕獲溶液中的待檢測抗原，再將標(biāo)記有抗體和拉曼探針的金屬納米顆粒溶膠(即SERS免疫探針)與基底免疫識別，在激發(fā)光照射下通過SERS免疫探針中金屬納米顆粒的表面增強(qiáng)

2、特性獲得拉曼分子的SERS信號，進(jìn)而對待測物進(jìn)行定性和定量的測定和分析。
　　本文針對“三明治”免疫結(jié)構(gòu)中的兩個關(guān)鍵部分，SERS免疫探針和免疫基底，分別進(jìn)行了設(shè)計和制備：1)提出了一種聚集體型SERS免疫探針即拉曼探針標(biāo)記免疫金納米聚集體，詳細(xì)介紹了聚集體型SERS免疫探針的制備方法，證實(shí)免疫探針具有高SERS活性和良好的生物特異性，可有效提高檢測靈敏度，實(shí)現(xiàn)高效的SERS免疫檢測。2)制作了高SERS活性基底并用作免疫基底，研

3、究了SERS免疫基底對提高檢測靈敏度的意義。首先提出了一種預(yù)聚集法自組裝了SERS活性銀納米粒子膜基底并用于免疫檢測。相比非SERS活性(聚賴氨酸修飾的玻片)免疫基底，上述SERS基底上輸出的免疫檢測信號強(qiáng)度提高了約3倍?；谠揝ERS基底和上述聚集體型SERS免疫探針，對human-IgG的免疫檢測限可達(dá)100fg/mL。為進(jìn)一步證實(shí)SERS免疫基底在免疫檢測中的作用，本文制備了兩類(有、無SERS活性)共5種基底并用于免疫檢測。研究

4、結(jié)果顯示SERS免疫基底能實(shí)現(xiàn)更加靈敏的免疫檢測；基底SERS增強(qiáng)能力的差異會影響檢測的靈敏性。據(jù)此，我們采用斜角鍍膜技術(shù)制備了可重復(fù)性高、具有更佳SERS活性的銀納米棒陣列型基底，并對銀納米棒分別進(jìn)行金修飾和二氧化硅包殼，改善了基底的穩(wěn)定性。銀納米棒和金修飾銀納米棒陣列型基底表面的免疫檢測結(jié)果表明，基于銀納米棒陣列型基底的免疫檢測靈敏度優(yōu)于基于銀納米粒子膜基底的檢測效果，在金修飾的銀納米棒陣列型基底上獲得了最靈敏的SERS免疫檢測。3