核（苷）酸的熒光增強(qiáng)效應(yīng)及其分析應(yīng)用.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文核（苷）酸的熒光增強(qiáng)效應(yīng)及其分析應(yīng)用姓名：李蕾申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：楊景和20030506堡壘塹二——————些壅塑鏊鯊鱉墾———————≤墼顯增強(qiáng)。同時(shí)提出了在絡(luò)合物中ATP和phen間存在堆積效應(yīng)，ATP吸收的能量通過堆積效應(yīng)轉(zhuǎn)移給phen，然后再轉(zhuǎn)移到Tb“上的可能的能量轉(zhuǎn)移通道。在論文的第四部分中，主要研究了十六烷基溴化吡啶(CPB)與TbGdDNA體系的相互作用。結(jié)果表明，CPB的加入能

2、夠使已有體系的共發(fā)光現(xiàn)象得到明顯的增強(qiáng)，且該體系的熒光強(qiáng)度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)成線性關(guān)系。將該體系用于DNA和RNA的檢測(cè)中，線性范圍分別為1x101lxlO‘gtml和910一一IxlO—g／ml，檢出限分別為41xlO。g／ml和32x1019／m1。另外，我們對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行了測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果令人滿意。我們對(duì)該效應(yīng)產(chǎn)生的機(jī)理進(jìn)行了較為深入的研究，認(rèn)為CPB和核酸通過靜電引力和氨鍵作用力使核酸在CPB上發(fā)生聚集而生成了陽離子表面活性

3、劑一核酸離子絡(luò)合物。而Gd”和Tb”能夠分別與核酸上的磷酸根鍵合，分別形成Tb核酸CPB和Gd核酸CPB絡(luò)合物。吸收能量后，通過分子間能量轉(zhuǎn)移將能量傳遞到Tb3上，從而增強(qiáng)鋱離子的特征熒光。另外，體系中釓絡(luò)合物的濃度遠(yuǎn)大于鋱絡(luò)合物的濃度，因而每一個(gè)鋱絡(luò)合物周圍均被許多釓絡(luò)合物包圍，形成了一個(gè)“能量絕緣殼”，減少了能量損失，提高了熒光量子產(chǎn)率。本論文的主要特點(diǎn)：1首次發(fā)現(xiàn)并研究了核營(yíng)酸體系中的稀土共發(fā)光效應(yīng)并將其應(yīng)用于核苷酸的測(cè)定中。這對(duì)

4、于核菅酸的研究是一個(gè)重要進(jìn)展。本方法為稀土共發(fā)光效應(yīng)的應(yīng)用開辟了一個(gè)新的領(lǐng)域，同時(shí)也為核苷酸的檢測(cè)提供了一個(gè)新的熒光探針，該效應(yīng)使GMP和ATP的檢出限降低卜2個(gè)數(shù)量級(jí)。與核苷酸的其它熒光光度法相比，本方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、線性范圍寬、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。2提出了核苷酸體系中稀土共發(fā)光效應(yīng)的作用機(jī)理。在Tb—GdGMP體系中，認(rèn)為它們之間可能通過氧橋連接成網(wǎng)狀絡(luò)合物，同時(shí)通過氧橋?qū)崿F(xiàn)了能量在絡(luò)合物之間的傳遞。在Tb—Gd—phen—ATP

5、體系中，認(rèn)為稀土離子與ATP、phen之間能夠形成Tb—ATPphen和Gd—ATP—phen絡(luò)合物，兩絡(luò)合物能夠聚合在一起形成一大的聚集體。同時(shí)配體ATP與phen之間還存在著芳環(huán)堆積效應(yīng)。這種堆積效應(yīng)不僅增強(qiáng)了絡(luò)合物的穩(wěn)定性，同時(shí)也使得ATP上的能量能夠phen轉(zhuǎn)移給Tb”。3實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過表面活性劑引入，使得核酸體系的共發(fā)光現(xiàn)象得到明顯的增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CPB和核酸通過靜電引力和氫鍵作用力使核酸在CPB上發(fā)生聚集而生成了陽離予