基于EGFR為靶點(diǎn)的2-氨基-苯并[d]噻唑衍生物的設(shè)計(jì)、合成與抗NSCLC活性初探.pdf

1、目的：目前用于治療非小細(xì)胞肺癌的EGFR小分子抑制劑已經(jīng)發(fā)展到了第三代，并且這三代傳統(tǒng)的抑制劑多以中嘧啶或喹啉母核藥物較多，因此這些類型的化合物所涉及的知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題較多，而苯并噻唑母核應(yīng)用于EGFR領(lǐng)域較少，部分先導(dǎo)化合呈現(xiàn)良好抗腫瘤活性，且相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)糾紛較少。此外還具有抗菌抗炎等多種藥理作用。本文以化合物4i[7-氯-N-（2,6-二氯苯基）苯并[d]噻唑-2-胺]為先導(dǎo)化合物，EGFR為靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)合成了一系列2-氨基-苯并噻唑衍生

2、物，并測(cè)試了所有目標(biāo)化合物對(duì)野生型 EGFR高表達(dá)的細(xì)胞與突變型 EGFR高表達(dá)的細(xì)胞的抑制活性，根據(jù)初篩結(jié)果進(jìn)一步探究驗(yàn)證目標(biāo)化合物的抗腫瘤活性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，探究構(gòu)效關(guān)系，為了進(jìn)一步尋找臨床上治療非小細(xì)胞肺癌的有效低毒小分子抑制劑奠定基礎(chǔ)。
　　方法：⑴以2-氨基-苯并噻唑?yàn)樵?，以威廉姆遜合成法，胺的鹵代反應(yīng)及?；磻?yīng)等合成了40個(gè)2-氨基-苯并噻唑衍生物，通過 ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、UV、IR等進(jìn)行了

3、結(jié)構(gòu)確認(rèn)。⑵采用MTT法，測(cè)試了目標(biāo)化合物在10μM濃度下對(duì)beas-2b（肺正常細(xì)胞）的影響（即毒性作用），結(jié)果顯示A，B， C類對(duì)beas-2b(肺正常細(xì)胞）基本無毒性作用。進(jìn)一步地，對(duì)所有化合物進(jìn)行抗腫瘤初篩，涉及的細(xì)胞種類包括A431，A549, H1975, HCC827, H1650；并在10μM，1μM，0.5μM，0.1μM，0.01μM濃度下，測(cè)試已篩選出的化合物的IC50值。⑶采用流式細(xì)胞分析法，檢測(cè)化合物對(duì)A431

4、, A549兩種細(xì)胞的促凋亡和周期阻滯作用，采用細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)測(cè)試了化合物B7對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲阻滯作用。⑷在1μM，5μM，10μM下，利用Western Blot法檢測(cè)化合物B7對(duì)EGFR相關(guān)通路蛋白EGFR/p-EGFR，ERK/p-ERK，AKT/p-AKT表達(dá)的影響。⑸用分子對(duì)接方法模擬活性最優(yōu)化合物B7與 EGFR的結(jié)合模型，觀察其結(jié)合模式；⑹采用ELISA法對(duì)所有化合物進(jìn)行抗炎初篩，涉及指標(biāo)為IL-6，TNF-α。
　　

5、結(jié)果：①共合成40個(gè)苯并噻唑類衍生物，其中未見報(bào)道化合物有25個(gè)，所有化合物均通過ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、UV，IR等進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)。②MTT結(jié)果顯示，目標(biāo)化合物對(duì)正常細(xì)胞均無毒性，對(duì)所測(cè)試的腫瘤細(xì)胞中A431, A549均顯示出抑制活性，以B1, B3, B7, B10,C1, C2較好，B7最為突出；對(duì)H1975, HCC827,H1650幾乎無作用。流式結(jié)果顯示，在10、20μM時(shí), B7對(duì)細(xì)胞的促凋亡作用和先導(dǎo)

6、化合物相當(dāng)，且B7對(duì)A549和A431有明顯的周期阻滯作用。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，B7在0.01μM時(shí)對(duì)A549和A431具有明顯的抑制作用，且可持續(xù)至48h。而Western Blot結(jié)果顯示，B7在10μM時(shí)對(duì)EGFR/p-EGFR，ERK/p-ERK， AKT/p-AKT的表達(dá)抑制最明顯，甚至優(yōu)于先導(dǎo)。其分子對(duì)接結(jié)果顯示，B7上的硝基與野生EGFR結(jié)合口袋三個(gè)氨基酸LYS-745，ASP-855，PHE-723均有結(jié)合作用。③ELISA結(jié)

7、果顯示，對(duì)于IL-6, TNF-α兩種因子A1，A2，B2，B11具有較好的抗炎活性，均達(dá)到了50％以上，其中以B11最佳，達(dá)到了80%以上。
　　結(jié)論：根據(jù)初步抗炎抗腫瘤活性研究以及藥效分析，在對(duì)野生型EGFR高表達(dá)的細(xì)胞與突變型EGFR高表達(dá)的細(xì)胞的抑制活性中，所有合成的化合物中 B類化合物抑制效果最為顯著，但均對(duì)突變型細(xì)胞的抑制活性不明顯。對(duì)A431與A549的活性以B7最為突出，毒性也小，其相對(duì)于先導(dǎo)化合物來說具有一定的選