毛細(xì)管電泳用于Aβ及天然產(chǎn)物活性成分的研究.pdf

1、阿爾茨海默?。?Alzheimer's disease，AD）是一種神經(jīng)退行性疾病，嚴(yán)重影響人的認(rèn)知能力和正常生活。目前，普遍認(rèn)為該病是由β-淀粉樣蛋白（Aβ）的沉積引起的。Aβ的寡聚體和聚集體被認(rèn)為具有一定的神經(jīng)毒性。因此，Aβ可以作為潛在的藥物靶點(diǎn)來研究治療 AD的方法。現(xiàn)行的治療AD的藥物有很多種，其中金屬硫蛋白（MT）是一種低分子量、金屬含量高的蛋白，能夠調(diào)解人體內(nèi)金屬離子水平，改變Aβ病理過程。另外值得一提的是天然產(chǎn)物中活性成

2、分在AD治療中的作用，紫薯作為常見的食物，它的藥用價(jià)值得到研究。有報(bào)道稱紫薯中的咖啡奎寧酸能夠提高學(xué)習(xí)能力和空間認(rèn)知能力，對(duì)AD治療存在潛在的應(yīng)用價(jià)值，有必要深入研究紫薯中的活性成分。
　　紫薯作為一種常見的農(nóng)作物，其質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)是農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。三嗪類除草劑是比較廣泛使用的田間除草劑，長(zhǎng)期暴露在該類農(nóng)藥環(huán)境下，能夠誘發(fā)癡呆。因此，紫薯中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)具有重要意義。
　　毛細(xì)管電泳（CE）具有高效、快速、試樣用量少等優(yōu)

3、點(diǎn)，是分析復(fù)雜體系最強(qiáng)有力的技術(shù)之一。本文以CE為主要手段，研究生物分子間的相互作用。為了彌補(bǔ)CE靈敏度不足的缺點(diǎn)，利用QuEChERS方法對(duì)樣品進(jìn)行凈化等前處理，提高信噪比；利用 Dextran@Fe3O4磁性納米顆粒對(duì)樣品進(jìn)行選擇性富集，提高靈敏度。主要完成了以下工作：
　　1.建立了利用前沿分析-毛細(xì)管電泳法研究 Aβ1-16與 MT相互作用的新方法。采用未涂層熔融石英毛細(xì)管；檢測(cè)波長(zhǎng)為192 nm，運(yùn)行緩沖液為60 mmo

4、l/L硼酸鹽，pH=8.48，分離電壓12 kV，50 mbar下壓力進(jìn)樣18 s為最優(yōu)條件，0.1％DMSO作為電滲標(biāo)記物。在最佳條件下，測(cè)定MT與Aβ相互作用，利用克洛茨方程計(jì)算二者的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)是0.5，結(jié)合常數(shù)是8.9×103 M-1。
　　2.利用Dextran@Fe3O4復(fù)合納米顆粒選擇性提取紫薯中的活性成分，提取液成分用毛細(xì)管電泳進(jìn)行分離檢測(cè)。采用未涂層熔融石英毛細(xì)管，緩沖液為17.5 mmol/L硼砂含有20%甲醇（

5、V/V），pH=9.3，分離電壓18 kV，進(jìn)樣時(shí)間為15 s，并對(duì)納米顆粒的用量、吸附時(shí)間、洗脫劑、洗脫時(shí)間等因素進(jìn)行優(yōu)化。在最優(yōu)條件下，至少發(fā)現(xiàn)6種紫薯活性成分得到了有效的分離。
　　3.將QuEChERS樣品前處理技術(shù)與毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜法相結(jié)合，建立了一種快速、高效檢測(cè)紫薯中三嗪類農(nóng)藥殘留含量的方法。QuEChERS處理樣品過程中，乙腈作為萃取劑，伯仲胺（PSA）和石墨化碳黑（GCB）作為樣品凈化的吸附劑。毛細(xì)管采用未涂層