丹參酮IIA-納米銀復(fù)合物凝膠的制備及其用于中耳炎的治療.pdf

1、中耳炎作為耳科臨床常見(jiàn)病與多發(fā)病，嚴(yán)重影響著人類(lèi)的健康和生活質(zhì)量。局部應(yīng)用抗生素在中耳炎治療方面有重要意義，但其耐藥性及潛在耳毒性卻限制了抗生素的廣泛應(yīng)用。為了更好的實(shí)現(xiàn)中耳炎的治療，本文設(shè)計(jì)了一種結(jié)合中藥活性成分丹參酮IIA和無(wú)機(jī)材料納米銀的新型藥物遞送系統(tǒng)。該系統(tǒng)由正電性的殼聚糖或溶菌酶與負(fù)電性的納米銀通過(guò)靜電吸附作用包裹納米銀，隨后將其與丹參酮 IIA包合物相結(jié)合，發(fā)揮協(xié)同抗菌作用，同時(shí)減少銀的用量，從而構(gòu)建得到抗菌性能更優(yōu)、無(wú)潛

2、在耳毒性及耐藥性的新型抗菌制劑。進(jìn)一步以聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）為基質(zhì)，制備成丹參酮 IIA/納米銀復(fù)合物凝膠，將其應(yīng)用于局部治療中耳炎，并就該復(fù)合物凝膠對(duì)中耳和內(nèi)耳的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用蘭花蕉內(nèi)生真菌菌體水浸液與硝酸銀生物合成納米銀顆粒，采用紫外全波長(zhǎng)掃描（UV-vis）、粒徑和電位分析（DLS）、透射電子顯微鏡（TEM）、X射線(xiàn)衍射分析（XRD）、及傅立葉變換紅外光譜分析（FTIR）等表征

3、手段對(duì)生物合成的納米銀進(jìn)行表征。結(jié)果表明，利用蘭花蕉OC14菌株水浸液與硝酸銀孵育合成了球形或近球形納米銀顆粒，平均粒徑約為46.1nm，納米銀分散性好，結(jié)晶性良好，屬于面心立方結(jié)構(gòu)。⑵采用共孵育法制備殼聚糖納米銀復(fù)合物和溶菌酶納米銀復(fù)合物，通過(guò)改變殼聚糖分子量、濃度以及納米銀膠體溶液與殼聚糖溶液的投料比，考察復(fù)合物的粒徑分布和抗菌性能。使用不飽和醇溶液法制備丹參酮IIA的羥丙基-β-環(huán)糊精包合物，將兩者共孵育形成丹參酮IIA/銀復(fù)合物

4、的納米粒體系。采用K-B紙片擴(kuò)散法、二倍稀釋法和對(duì)細(xì)菌的抑制率評(píng)價(jià)丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物的抗菌性能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在24 h時(shí)與丹參酮IIA和納米銀相比，復(fù)合物的最低抑菌濃度更低，且具有更高的抑制率，表現(xiàn)為協(xié)同作用。⑶利用聚合物沉淀型原位凝膠的形成原理，選擇凝膠基質(zhì)材料PLGA，輔以適量的N-甲基吡咯烷酮，制備丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物凝膠，得到黃棕色或紅棕色半透明液體，質(zhì)地均勻細(xì)膩，有一定粘稠度。在PBS中可迅速形成球狀液滴，完成溶劑交

5、換后形成黃橙色或紅褐色的半固體凝膠儲(chǔ)庫(kù)。體外釋放結(jié)果顯示丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物溶液的體外釋藥周期約為7天，而丹參酮IIA對(duì)照品的釋藥周期僅為1.5天，表明該制劑有較為明顯的緩釋效果。而凝膠劑顯示比溶液劑具有更為顯著的緩釋作用。⑷收集中耳腔灌洗液和上皮組織，應(yīng)用HPLC法測(cè)定中耳腔注入丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物溶液劑和凝膠劑后的藥時(shí)曲線(xiàn)。運(yùn)用軟件分析數(shù)據(jù)得丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物凝膠劑的血藥濃度Cmax分別為8.05±3.49μg/

6、mL和10.67±4.27μg/mL，明顯高于溶液劑的3.08±1.73μg/mL和3.93±1.10μg/mL。凝膠劑的藥物曲線(xiàn)下面積AUC0-t與溶液劑曲線(xiàn)下面積AUC0-t相比，提高了近3倍。結(jié)果表明丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物凝膠可顯著提高生物利用度，使藥物充分發(fā)揮藥效。⑸通過(guò)鼓膜穿刺注入金黃色葡萄球菌菌懸液建立豚鼠中耳炎模型，鼓室注射給藥后分別在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)各藥物和生理鹽水組比較，細(xì)菌培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)皆有

7、下降，表明各藥物具有一定的藥效，且丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物細(xì)菌培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)顯著低于納米銀和丹參酮 IIA，在24 h的細(xì)菌數(shù)分別為243×104CFU/mL、371×104CFU/mL和530×104CFU/mL。并且各丹參酮 IIA/納米銀復(fù)合物治療組顯示出更明顯的TNF-α和IL-8水平下降趨勢(shì)（P＜0.05）。治療結(jié)束后觀(guān)察中耳粘膜切片的炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況，可見(jiàn)氧氟沙星滴耳液組和丹參酮IIA/納米銀復(fù)合物組炎性細(xì)胞顯著減少。說(shuō)明丹參