納米光學(xué)生物傳感在纖維蛋白檢測中的研究.pdf

1、纖維蛋白是血液凝固的重要成分之一，它是在循環(huán)系統(tǒng)中由纖維蛋白原經(jīng)凝血酶作用轉(zhuǎn)變而成的，發(fā)揮著凝血和生理止血的功能。纖維蛋白還參與體內(nèi)的炎癥、組織損傷、組織修復(fù)等一系列病理和生理過程。因此，對纖維蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的深入研究不僅有助于我們認(rèn)識纖維蛋白在凝血過程中的重要地位，也為我們在科研和臨床治療方面提供了新的思路。
　　近年來，隨著納米科技的發(fā)展，納米材料已廣泛應(yīng)用于生物傳感技術(shù)。本論文利用納米金和單壁碳納米管的納米特性，建立非標(biāo)記

2、檢測纖維蛋白的方法。具體內(nèi)容如下：
　　一、基于納米金內(nèi)濾效應(yīng)，非標(biāo)記、高靈敏檢測纖維蛋白
　　納米金（AuNPs）可調(diào)且較寬的吸收帶與許多熒光供體重合，可用作熒光猝滅劑。本工作將利用納米金的內(nèi)濾效應(yīng)，建立簡單、快速、高靈敏檢測纖維蛋白的新方法。本工作制備了吸收峰為520 nm的納米金，可強(qiáng)烈吸收熒光素鈉（FAM）的熒光，產(chǎn)生內(nèi)濾效應(yīng)。在纖維蛋白的存在下，AuNPs與纖維蛋白相互作用，從而誘導(dǎo) AuNPs聚集，吸收峰紅移，內(nèi)

3、濾效應(yīng)降低，熒光恢復(fù)。在最優(yōu)化的條件下，纖維蛋白的濃度在0.125–2.5 nM范圍內(nèi)呈現(xiàn)一個(gè)良好的線性關(guān)系?；貧w線方程是ΔF=360.7+92.7c（c是纖維蛋白的濃度，nM），相關(guān)系數(shù)為0.9989，該方法的最低檢出限為40 pM。與傳統(tǒng)的熒光檢測方法相比，該方法具有快速、簡單、方便、易于操作，已成功的應(yīng)用于人體血漿樣品的定量檢測。
　　二、基于單壁碳納米管降低背景信號高靈敏檢測纖維蛋白
　　本實(shí)驗(yàn)基于單壁碳納米管（SW

4、NTs）良好的熒光猝滅作用，運(yùn)用熒光分析方法，對纖維蛋白進(jìn)行高靈敏檢測。本實(shí)驗(yàn)選用的溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，與Fib相結(jié)合，熒光強(qiáng)度增大，與纖維蛋白相結(jié)合，熒光強(qiáng)度也可增大。但兩者熒光強(qiáng)度相近，難以區(qū)分，因此加入SWNTs。SWNTs不僅能吸附與Fib相結(jié)合的EB，而且還能吸附游離在溶液中的 EB，使得背景信號降低，熒光被猝滅。加入 SWNTs后，由于纖維蛋白的特殊結(jié)構(gòu)，空間位阻較大，纖維蛋白較難被吸附，所以 SWNTs對熒

5、光的猝滅作用較弱，熒光強(qiáng)度較強(qiáng)。據(jù)此可利用SWNTs能夠猝滅熒光，降低體系背景信號的作用來對纖維蛋白進(jìn)行檢測。在最優(yōu)的條件下，纖維蛋白的濃度在1.25-10 pM范圍內(nèi)呈現(xiàn)一個(gè)良好的線性關(guān)系?；貧w線方程為ΔF=70.99+4.634C（C是纖維蛋白的濃度，pM），線性相關(guān)系數(shù)R為0.9921，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的范圍在3.5％-6.3%，該方法的最低檢出限為0.5 pM。與傳統(tǒng)的熒光檢測方法相比，該方法省時(shí)，簡單，方便，易于操作，而且成功的應(yīng)

6、用于人體血漿樣品的定量檢測。
　　三、小檗堿和纖維蛋白的作用研究
　　小檗堿屬于季銨型異喹啉類生物堿，具有極弱熒光性。本工作研究發(fā)現(xiàn)纖維蛋白原與小檗堿作用后，產(chǎn)生一個(gè)強(qiáng)熒光峰；纖維蛋白也可與小檗堿作用，產(chǎn)生熒光峰。但兩者難以區(qū)分，因此在實(shí)驗(yàn)中引入了SWNTs。首先讓SWNTs與Fib和纖維蛋白分別結(jié)合然后加入到小檗堿溶液中。Fib纏繞在碳納米管表面，無法與小檗堿作用，其熒光強(qiáng)度極低；而纖維蛋白的空間位阻大，遠(yuǎn)離 SWNTs，