絲素肽結(jié)構(gòu)與止血性能的研究.pdf

1、日常生活中對突發(fā)性事故的急救治療，醫(yī)院里對病人手術(shù)過程中的創(chuàng)傷止血，戰(zhàn)爭中對受傷戰(zhàn)士的現(xiàn)場救護(hù)，對于傷者局部有效的快速止血非常重要。未受控制的出血已經(jīng)成為威脅傷員生命，導(dǎo)致突發(fā)事故、醫(yī)療手術(shù)或戰(zhàn)場死亡的主要原因?？焖儆行У闹寡牧峡纱蠓冉档蛡麊T的死亡率。因此，開發(fā)快速、安全、有效的新型止血材料成為醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域的重要研究課題。
　　絲素蛋白作為從蠶絲中提取的一種天然高分子材料，具有無毒、炎癥反應(yīng)低、生物相容性良好、可生物降解等特點

2、，廣泛應(yīng)用于藥物控釋、人造皮膚、人造韌帶以及組織工程等領(lǐng)域。絲素蛋白的水解產(chǎn)物絲素肽，在日用化工、食品加工以及生物醫(yī)藥等領(lǐng)域均有開發(fā)應(yīng)用，但絲素肽在止血材料的研究應(yīng)用尚未見報道?，F(xiàn)階段對于粉狀止血材料的研究較少，鑒于粉狀止血材料使用及存儲方便，對其深入的研究探討很有必要。
　　本文采用CaCl2-乙醇-水（摩爾比1:2:8）三元體系、磷酸和氫氧化鈉對脫膠蠶絲進(jìn)行水解，通過噴霧干燥和冷凍干燥制備不同分子量的絲素肽，對其結(jié)構(gòu)和性能進(jìn)行

3、測試分析，并用于止血實驗和體外細(xì)胞毒性實驗，初步研究并探討了絲素肽的理化性質(zhì)和止血性能之間的關(guān)系，主要研究內(nèi)容如下：
　　1.以CaCl2-乙醇-水（摩爾比1:2:8）三元體系為水解溶液，以58℃，68℃，78℃，88℃，98℃五檔水解溫度和1h，3h，9h，24h四種水解時間為不同條件水解脫膠蠶絲，通過噴霧干燥和冷凍干燥制備鹽解絲素肽。采用凝膠過濾色譜（GPC）、傅里葉紅外變換光譜（FTIR）、X-射線衍射（XRD）、掃描電鏡（

4、SEM）和氨基酸組分分析等測試手段對絲素肽的分子量分布、聚集態(tài)結(jié)構(gòu)、表面形貌及氨基酸組成等進(jìn)行表征。結(jié)果表明，隨著水解溫度的提高和水解時間的延長，絲素肽的分子量降低，絲素肽的聚集態(tài)結(jié)構(gòu)以無規(guī)卷曲為主，存在少量的β-折疊結(jié)構(gòu)，絲素肽粉末形貌以表面褶皺的球囊狀顆粒為主，存在球形顆粒，粒徑隨著分子量的降低變小且更為均勻，主要氨基酸組分包括絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸和酪氨酸四種，其組分及含量與水解溫度和水解時間無明顯關(guān)聯(lián)；
　　2.以磷酸溶液

5、為水解溶液，設(shè)計磷酸濃度、水解溫度和水解時間三因素正交水解實驗，通過冷凍干燥制備酸解絲素肽粉末。采用同樣的測試手段對酸解絲素肽進(jìn)行性能表征。結(jié)果表明，酸解絲素肽的分子量明顯降低，主要分布在3.8~12.6kDa，絲素肽的聚集態(tài)結(jié)構(gòu)為無規(guī)卷曲，絲素肽粉末呈現(xiàn)無規(guī)碎片狀，主要氨基酸組分包括甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸等。
　　3.以氫氧化鈉溶液為水解溶液，設(shè)計氫氧化鈉濃度、水解溫度和水解時間三因素正交水解實驗，通過冷凍干燥制備絲素

6、肽粉末。測試手段同上所述。結(jié)果表明，堿解絲素肽的分子量較低，分布集中在3.6~18.9kDa，絲素肽的聚集態(tài)結(jié)構(gòu)為無規(guī)卷曲，絲素肽粉末表面形貌與酸解絲素肽相似，主要氨基酸組分為天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和酪氨酸等。
　　4.不同水解方法得到的絲素肽的止血性能及體外細(xì)胞毒性研究。通過凝血彈性描記（TEG）測試、大鼠肝臟創(chuàng)傷止血模型和體外細(xì)胞毒性實驗表征絲素肽的止血性能和生物相容性。結(jié)果表明，高分子量鹽解絲素肽具備與Arista相近的止