蜂蜜中有機(jī)活性組分檢測(cè)的色譜方法學(xué)研究.pdf

1、中國是世界養(yǎng)蜂大國，也是世界蜂蜜生產(chǎn)大國，另外還是蜂蜜出口量最大的國家。蜂蜜中含有多種營養(yǎng)物質(zhì)，具有保健功能，深受人們的歡迎。蜂蜜中的很多成分都直接影響著它的顏色、香氣、口感和保健功效，而其中的有機(jī)活性組分會(huì)直接影響其營養(yǎng)價(jià)值及其抗菌，抗氧化等生物性功能。為了更好的評(píng)價(jià)蜂蜜的品質(zhì)，本文采用色譜技術(shù)（高效液相色譜及高效毛細(xì)管電泳）建立了蜂蜜中低分子量黃酮、有機(jī)酸和水溶性維生素類化合物的毛細(xì)管電泳及高效液相色譜分離分析方法。
　　本研

2、究主要內(nèi)容包括：⑴黃酮是蜂蜜中的重要活性成分，通過直接紫外檢測(cè)毛細(xì)管區(qū)帶電泳法開發(fā)了來自不同地理來源的許多蜂蜜中的類黃酮的分析方法。在25kV的分離電壓下，使用20mM硼酸鹽作為運(yùn)行緩沖液在pH=8.4下在5min內(nèi)完全分離包括蘆丁、槲皮素、山奈酚和楊梅酮的四種典型黃酮類化合物。對(duì)于四種類黃酮獲得了在2.0-500mg/L的范圍內(nèi)的良好的線性關(guān)系，并且檢測(cè)限范圍為1.17至1.76mg/L。四種類黃酮的回收率在80％-107％的范圍內(nèi)。

3、應(yīng)用該方法分離測(cè)定了中國河南省12個(gè)養(yǎng)蜂場蜂蜜樣品中的黃酮類化合物。在許多蜂蜜樣品中僅檢測(cè)到蘆丁和槲皮素，其可以作為鑒定來自不同地理來源的蜂蜜的標(biāo)記物。⑵采用毛細(xì)管電泳法，通過場放大樣品注射技術(shù)（FASI）建立了7種有機(jī)酸的分析檢測(cè)方法，對(duì)影響FASI的參數(shù)進(jìn)行系統(tǒng)研究，包括pH、注射時(shí)間、水柱長度、緩沖液濃度等。在最佳條件下檢測(cè)靈敏度明顯增強(qiáng)，各組分富集倍數(shù)可增加7-72倍。酒石酸、原兒茶酸、綠原酸、草酸、沒食子酸、檸檬酸和香草酸的檢

4、測(cè)限分別為0.56、0.26、0.85、0.90、0.65、0.52和0.55mg/L。該方法成功應(yīng)用于來自河南省不同地市蜂場的14種蜂蜜實(shí)際樣品的檢測(cè)。⑶采用響應(yīng)曲面法，設(shè)計(jì)三因素三水平的Box-Behnken的試驗(yàn),對(duì)影響毛細(xì)管電泳分離水溶性維生素B1、B3、B5、B6及維生素C的主要影響因素(緩沖溶液的濃度、分離電壓和柱溫)進(jìn)行了研究,以五種維生素中的最大分離度和最長保留時(shí)間為響應(yīng)函數(shù),建立了相應(yīng)的數(shù)學(xué)模型,得到了它們的最佳分離條

5、件為：17mmol/L的硼砂電泳緩沖液、15 kV電壓、19℃柱溫，并在最優(yōu)的分離條件下，3分鐘內(nèi)可快速分離蜂蜜樣品中的五種水溶性維生素。⑷建立了同時(shí)檢測(cè)維生素 C和多巴胺的高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法。其中高效液相色譜的色譜柱采用Diamonsil C18(2)5μ150×4.6mm色譜柱，并以體積比為74:24:2的0.05mol/L磷酸二氫鈉、0.02mol/L檸檬酸和甲醇的混合液為流動(dòng)相，設(shè)定檢測(cè)波長為280nm，流速為1mL/m

6、in。在室溫條件下，維生素 C的線性范圍在高效液相色譜和電化學(xué)檢測(cè)器中分別為2-200μmol/L和0.05-200μmol/L，檢出限分別為1.68μmol/L和0.03μmol/L；多巴胺在高效液相色譜和電化學(xué)檢測(cè)器中分別為2-200μmol/L和0.05-200μmol/L，檢出限分別為1.25μmol/L和0.01μmol/L。高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)器聯(lián)用的方法更為簡便靈敏度和準(zhǔn)確率更高，且選擇性更好。⑸建立了可靠，靈敏的反相

7、高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)（HPLC-ECD）方法測(cè)定蜂蜜中三種有機(jī)酸類電化學(xué)活性化合物（沒食子酸、綠原酸、咖啡酸）。色譜分離在反相 C18柱上進(jìn)行，流動(dòng)相由4%的醋酸水溶液（pH=4.0）和甲醇組成，通過電流檢測(cè)，使用工作電位為+0.80V的玻碳電極進(jìn)行梯度洗脫。該方法的線性，精度，精度和定量和檢測(cè)限已被驗(yàn)證。在優(yōu)化條件下，電化學(xué)校準(zhǔn)曲線的線性回歸分析顯示出良好的線性關(guān)系，在0.005 mg/L-6.0 mg/L的線性范圍內(nèi)，峰面積與濃