適配體納米金比色法靈敏度影響因素研究及其在食品安全檢測中的應(yīng)用.pdf

1、適配體可以吸附在納米金上，當(dāng)靶標(biāo)存在時(shí)，則從納米金上解離與靶標(biāo)結(jié)合從而在鹽的作用下控制納米金的顏色變化;而當(dāng)適配體上標(biāo)記著熒光素時(shí)，與納米金結(jié)合后導(dǎo)致熒光淬滅，再加入靶標(biāo)，適配體離開納米金與靶標(biāo)結(jié)合，熒光得以恢復(fù)，從而分別提供了簡單、快速、可以肉眼觀察的比色分析技術(shù)和靈敏、高效的熒光分析技術(shù)。本研究通過對納米金溶液優(yōu)化從而提高抗生素藥物磺胺二甲基嘧啶的比色/熒光法檢測靈敏度;對適配體優(yōu)化從而提高環(huán)境污染物17β-雌二醇的比色法檢測靈敏度

2、;自行設(shè)計(jì)polyT10從而建立農(nóng)藥滅蠅胺的高靈敏比色檢測方法。主要內(nèi)容包括以下三部分:
　　1、研究了納米金溶液中殘留的非納米金成分對基于適配體納米金比色法和熒光法靈敏度的影響。納米金在制備過程中會殘留一些非納米金成分在其溶液中，其中的檸檬酸鈉和三種酸（鹽酸、檸檬酸、酮戊二酸）在適配體納米金比色法和熒光法中起著抑制的作用。通過將納米金溶液離心去上清液后用水重新溶解，結(jié)果發(fā)現(xiàn):首先，檸檬酸鈉能增強(qiáng)標(biāo)記在適配體上的FAM熒光值，從而

3、降低了納米金的熒光淬滅效率;其次，三種酸能淬滅FAM的熒光，從而降低了加入靶標(biāo)后的熒光恢復(fù)率;最后，三種酸降低了納米金溶液的pH，使納米金表面吸附的適配體增加，需要有更多的靶標(biāo)與適配體反應(yīng)，從而降低了比色法的靈敏度。以磺胺二甲基嘧啶(SDM)為例，發(fā)現(xiàn)與原納米金相比，用水復(fù)溶納米金可以將其比色/熒光法的靈敏度都提高10倍。
　　2、研究了適配體鏈長度對基于適配體納米金比色法靈敏度的影響。將17β-雌二醇的76mer適配體截取成P1

4、和P2兩個(gè)片段，結(jié)果發(fā)現(xiàn)P1+P2仍保持著原76mer適配體與靶標(biāo)結(jié)合的能力及特異性，而且由于短的ssDNA片段更容易吸附在納米金上，需要的濃度比長鏈的低，另外長的ssDNA在納米金上比短的ssDNA吸附得更緊，即結(jié)合力強(qiáng)，需要更多的靶標(biāo)才能與其反應(yīng)從而引起納米金溶液顏色變化，所以最后片段化的適配體使檢測靈敏度提高了10倍，即可以檢測到0.1ng/mL的17β-雌二醇。
　　3、建立了基于納米金和polyT10的滅蠅胺(CYR)比

5、色檢測方法。單鏈polyT10可以吸附在納米金上保護(hù)其在鹽存在時(shí)不變色，而當(dāng)加入靶標(biāo)火蠅胺時(shí)，polyT10與其通過氨鍵結(jié)合導(dǎo)致從納米金上解離，失去了保護(hù)的納米金在鹽存在時(shí)變藍(lán)，從而建立了一種高靈敏度的滅蠅胺比色檢測方法，并對鹽濃度和polyT10濃度進(jìn)行了優(yōu)化。在優(yōu)化好的條件下，用紫外分光光度計(jì)測定AuNPs的光譜變化及裸眼觀察AuNPs的顏色變化，檢測限(LOD)分別是1和5ng/mL。滅蠅胺在200倍的黃瓜樣品稀釋液中的檢測限和定