鞘蕊蘇有效成分合成酶基因克隆及其含量與生態(tài)環(huán)境相關(guān)性研究.pdf

1、鞘蕊蘇為唇形科植物毛喉鞘蕊花（Coleus forskohlii(Wild)Briq）的干燥全草，主產(chǎn)于印度、斯里蘭卡和尼泊爾等熱帶和亞熱帶地區(qū)，我國云南亦有分布。民間將該藥用于治療哮喘、腫瘤等疾病，療效顯著，稱為“神藥”。由于其藥用價值高，湖北福人藥業(yè)有限公司以鞘蕊蘇為君藥，配伍前胡、甘草組方，將其開發(fā)為“鞘蕊蘇膠囊”中藥新品種，并將云南野生毛喉鞘蕊花移植于湖北通城種植。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果表明，通城種植鞘蕊蘇與云南野生藥材的化學(xué)成

2、分和藥理作用基本一致，但其主要指標(biāo)性成分二萜化合物異佛司可林（isoforskalin）含量低于云南野生鞘蕊蘇。本論文對鞘蕊蘇有效成分合成酶基因克隆及其含量與生態(tài)環(huán)境的相關(guān)性進(jìn)行了研究，以期提高湖北通城種植鞘蕊蘇藥材有效成分含量。
　　1.以通城鞘蕊蘇種植基地的鞘蕊蘇葉片為試材，構(gòu)建鞘蕊蘇貝殼杉烯酸氧化酶基因模板，并以Sanger測序得到的基因片段設(shè)計擴(kuò)增引物，通過PCR技術(shù)得到鞘蕊蘇葉片貝殼杉烯酸氧化酶基因全長。結(jié)果表明，鞘蕊蘇

3、貝殼杉烯酸氧化酶基因全長為1500bp，氨基酸數(shù)目為499個，屬于CYP450家族，其氨基酸序列與其他物種的貝殼杉烯酸氧化酶具有一定的同源性。
　　2.以貝殼杉烯酸氧化酶基因全長設(shè)計引物，并加入HindⅢ和XbaⅠ酶切位點(diǎn)，采用PCR技術(shù)將擴(kuò)增得到的產(chǎn)物連接pYES2酵母菌株中，構(gòu)建表達(dá)載體，并對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明，貝殼杉烯酸氧化酶與其他物種的貝殼杉烯酸氧化酶相似度較高，與胡麻科植物芝麻的貝殼杉烯酸氧化酶相似度達(dá)78％

4、，與玄參科植物候面花貝殼杉烯酸氧化酶相似度達(dá)80%，與唇形科植物丹參貝殼杉烯酸氧化酶相似度達(dá)73%，與茜草科植物咖啡相似度達(dá)71%。與殼斗科植物板栗相似度達(dá)72%；其等電點(diǎn)為9.10，脂肪系數(shù)為87.11，分子式為C2566H4015N707O712S24，為親水蛋白，細(xì)胞定位其分布在細(xì)胞膜外。
　　3.通過比較云南祿勸野生鞘蕊蘇與湖北通城種植基地鞘蕊蘇生態(tài)環(huán)境的差異，探討鞘蕊蘇有效成分含量與其生態(tài)環(huán)境的相關(guān)性。采用現(xiàn)代分析方法，