基于微懸臂陣列對核酸適配子與生物分子相互作用力的研究及其檢測.pdf

1、本文基于微懸臂陣列研究分子間相互作用力，從而達到檢測的目的。詳細研究了單鏈結(jié)合蛋白(SSBP)和單鏈DNA(ssDNA)的相互作用;研究了土霉素(OTC)特異性適配子(OTC-Aptamer)與OTC的相互作用;研究了凝血酶特異性適配子與凝血酶的相互作用。主要內(nèi)容如下：
　　 ⑴將ssDNA(5'-HS-(CH2)6-T70-3'）通過Au-S共價鍵合到懸臂表面，在流動體系中研究ssDNA與SSBP的相互作用過程。研究發(fā)現(xiàn)懸臂的

2、偏轉(zhuǎn)程度與SSBP的濃度有關(guān)，SSBP的濃度越高其與ssDNA的相互作用過程越快，所誘導的懸臂程度偏轉(zhuǎn)也越大;當通入牛血清蛋白及溶菌酶等非特異性蛋白時懸臂則不產(chǎn)生明顯的偏轉(zhuǎn)。實驗結(jié)果表明ssDNA修飾的懸臂對SSBP有較寬響應范圍，最低響應濃度為0.008μg mL-1。
　　 ⑵利用微懸臂陣列傳感器在流動體系中研究OTC特異性適配子(5'-GGAATT CGC TAG CAC GTT GAC GCT GGT GCC CGG T

3、TG TGG TGC GAG TGTTGT GTG GAT CCG AGC TCC ACG TG-(CH2)6-SH-3')與OTC的相互作用，從而對OTC進行檢測。實驗結(jié)果表明OTC的濃度越高所引起的懸臂偏轉(zhuǎn)程度越大。但與OTC的結(jié)構(gòu)極為相似的四環(huán)素，強力霉素等物質(zhì)則不能引起懸臂的明顯偏轉(zhuǎn)。用高濃度的NaCl對已經(jīng)與OTC結(jié)合的懸臂表面進行處理后，該微懸臂陣列仍表現(xiàn)出較強的響應，具有較好的重復性。適配子修飾的微懸臂陣列是一個很好的OT

4、C傳感器，具有較高的靈敏度和選擇性，檢測限能達到0.2 nM。
　　 ⑶將凝血酶特異性的適配子(5'-SH-(CH2)6-GGT TGG TGT GGT TGG-3')通過Au-S共價鍵合到懸臂表面，在流動體系中研究凝血酶與凝血酶特異性的適配子的相互作用力及其作用過程。與傳統(tǒng)的檢測方法不同，微懸臂檢測技術(shù)是一種免標記的檢測手段，并可實時獲得凝血酶和DNA適配子相互作用實驗信息。實驗結(jié)果顯示微懸臂陣列是一種具有高度特異性和靈敏度的