基于磁性免疫傳感器的牛乳中四環(huán)素殘留檢測研究.pdf

1、乳品是我國消費者日常生活不可或缺的食品。“十一五”以來，我國乳品消費量迅速攀升，乳品行業(yè)快速發(fā)展，成為重要的食品產(chǎn)業(yè)之一。然而，在行業(yè)快速發(fā)展的同時，我國乳品業(yè)也存在著一些突出問題，特別是生鮮乳中的藥物殘留，如抗生素等，已對人類、特別是嬰幼兒的健康產(chǎn)生了嚴重威脅。目前，我國乳制品中藥物殘留檢測主要還依賴于微生物法、儀器分析法和酶聯(lián)免疫分析法。但微生物分析法常常出現(xiàn)假陽性結果，并且靈敏度較差；儀器分析法通常需要對樣品進行復雜的前處理，操作

2、復雜，測試時間長、費用高；傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫法雖然簡便、快速，但靈敏度較差，難以滿足抗生素殘留痕量、超痕量檢測的要求。針對上述問題，本研究開發(fā)了一種快速、高靈敏的四環(huán)素殘留磁性光學免疫傳感檢測方法，可用于生鮮乳中四環(huán)素殘留的測定。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴制備了以環(huán)氧基磁珠為載體，四環(huán)素-雞卵清白蛋白完全抗原（TC-OVA）為標記物的磁性免疫傳感探針。其關鍵制備技術條件為：磁珠使用量為1 mg，TC-OVA添加量為60μg，反應體系

3、為pH8.5含1.3 molL-1無水硫酸鈉的0.1 mol L-1 PBS緩沖溶液，渦旋混合均勻后置于樣品混合儀上在20℃偶聯(lián)反應14 h，所得免疫磁珠偶聯(lián)率為58.9％，TC-OVA絕對偶聯(lián)量為35.34μg。偶聯(lián)結束后，在20℃環(huán)境條件下，用pH8.5的含有2%牛血清白蛋白、2%甘氨酸和1.3 molL-1無水硫酸鈉的0.1 mol L-1PBS緩沖溶液對磁珠進行封閉14 h，可以達到最佳的封閉效果，能夠有效避免后續(xù)檢測中磁珠對非

4、目標蛋白的吸附。⑵建立了一種基于磁珠的免疫熒光檢測方法。檢測條件為：免疫磁珠用量20μg；四環(huán)素（Tetracycline，簡稱TC）抗體8000倍稀釋，用量100μL；過氧化氫濃度為5 mmol L-1，用量100μL。本方法靈敏度高，其檢測限為0.03 ng mL-1，比高效液相色譜-紫外檢測（HPLC-UV）檢測法低165倍；定量限為0.20 ngmL-1；TC濃度在0.25～32 ngmL-1的范圍內(nèi)，具有良好的線性關系，回歸方

5、程決定系數(shù)（R2）為0.9959。此外，本方法具有較高的準確度，在1～8 ngg-1添加水平下其回收率在82.6%～94.9%之間，變異系數(shù)從2.6%～6.9%。測定結果的日內(nèi)精密度和日間精密度均在5.0%以內(nèi)，具有較高的重復性和再現(xiàn)性，適合于生鮮乳中 TC殘留的快速、高靈敏檢測。⑶隨機抽取50份樣品分別使用本方法與HPLC-UV法（GB/T22990-2008）對樣品中的TC殘留進行測定，檢測結果具有高度吻合性，線性相關系數(shù)為0.99