補體激活和CD4+輔助性T淋巴細胞在藥疹患者肝損傷中的作用.pdf

1、研究背景：
　　藥疹(Drug eruption,DE)是臨床上常見的藥物皮膚不良發(fā)應(Adverse cutaneous drug reaction, ACDR),是指藥物通過不同途徑進入人體后導致的皮膚黏膜疾病。近年來藥疹的發(fā)生率逐年上升，藥疹類型和致敏藥物的種類也呈現(xiàn)多樣化趨勢。藥疹的發(fā)生，不僅帶來皮膚的損傷，同時伴多臟器損傷，嚴重者可危及生命，給家庭和社會帶來較重的經(jīng)濟負擔。因此，藥疹的發(fā)生機制、預防和治療的研究不僅是臨床

2、工作中的一項重要內(nèi)容，也是值得我們研究的公共衛(wèi)生問題。
　　藥疹的發(fā)生和發(fā)展是一個包括免疫機制在內(nèi)的多因素參與、多途徑介導的復雜過程，有研究表明T淋巴細胞的活化和功能在藥疹發(fā)病中起到重要的作用，而且在不同時期占主導作用的T淋巴細胞亞群也有很大差異，CD4+T細胞和CD8+T細胞以及CD4+T/CD8+T在免疫調(diào)節(jié)中都發(fā)揮重要作用。Th(T helper cell,Th)22是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種CD4+T細胞亞群，主要在皮膚黏膜屏障

3、系統(tǒng)發(fā)揮作用，目前在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病、特應性皮炎等皮膚疾病中研究較多，而在藥疹中的研究較少。同時有研究發(fā)現(xiàn)在三氯乙烯藥疹樣皮炎(Dermatitis Medicamentosa-like of Trichloroethylene, DMLT)的動物模型中，Th1、Th17在CD4+T細胞中的比例以及Th1/Th2的比例失衡在其發(fā)病中可能發(fā)揮重要作用，而補體可能參與了T細胞亞群的調(diào)節(jié)。有研究發(fā)現(xiàn)在DMLT患者血清中補體3(Compl

4、ement3，C3)的水平下降，且補體C3的水平與肝臟損傷呈負相關，該研究認為在DMLT藥疹患者體內(nèi)補體C3的下降是由于肝臟損傷導致補體合成的下降；前期課題組研究也發(fā)現(xiàn)藥疹患者血清中C3顯著下降，這與三氯乙烯藥疹樣皮炎中的研究一致，但是補體C3的下降是因為肝臟損傷導致其合成下降還是由于補體激活消耗C3所致，我們尚不清楚。因此，本課題擬在課題組前期研究基礎上，進一步探討藥疹患者中免疫相關指標的變化、補體C3降低的原因以及不同CD4+輔助性

5、T細胞亞群在藥疹發(fā)生過程中的可能作用。
　　研究目的：
　　分析不同程度肝損傷藥疹患者免疫相關指標的變化，檢測藥疹患者血清補體蛋白水平、T細胞相關炎癥因子以及T細胞亞群等指標的變化，探討藥疹患者免疫功能、補體蛋白、T細胞亞群和相關炎癥因子表達水平的變化及其在藥疹中的可能作用。
　　研究方法：
　　1、通過現(xiàn)場信息采集和查閱病歷的方法收集藥疹患者基礎資料，分析安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院皮膚科2014年9月至2016年

6、3月期間住院的194例藥疹患者資料，對患者的基本資料(性別、年齡、藥疹類型、致敏藥物、潛伏期、住院天數(shù)、住院費用、肝功能、免疫相關指標等)進行統(tǒng)計分析。
　　2、收集研究期間35例藥疹患者和匹配健康對照者的血清，通過全自動生生化儀檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Asparate transaminase,AST)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immune

7、 sorbent assay,ELISA)檢測藥疹患者血清中IL-22、IL-13的表達，采用流式細胞微球技術(Cytometric Bead Array,CBA)的方法檢測藥疹患者血清中γ干擾素(Interferonγ,IFN-γ)、白介素4(Interleukin4,IL-4)、IL-17、IL-2、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor–α,TNF-α)的表達水平，利用FCAP Arra

8、y軟件和SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。
　　3、收集研究期間35例藥疹患者和匹配健康對照者的血清，同時收集藥疹患者出院時血清做前后對照，采用CBA的方法檢測藥診患者血清補體蛋白C3a、C4a、C5a的表達水平，利用FCAP Array軟件和SPSS16.0對數(shù)據(jù)分析。
　　4、收集研究期間30例住院藥疹患者和健康對照的外周血，通過流式的方法檢測藥疹患CD4+T、CD8+T細胞的比例以及Th1、Th2、Th17、Th22

9、細胞亞群在CD4+T細胞中的比例變化，通過Flowjo7.6和SPSS16.0對數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　1、194例藥疹患者基本信息
　　研究期間共收集194例藥疹患者臨床資料。其中男性84例(43.2%)，女性110例(56.4%)。根據(jù)K-S檢驗，藥疹患者年齡分布服從正態(tài)分布，其中年齡最小者1歲，最大者87歲，平均年齡48.46歲。住院費用最少1462.75元，最多73727.6元。住院時間最短1天，最長5

10、2天，潛伏期最短2天，最長53天。藥疹類型有發(fā)疹型藥疹、蕁麻疹樣藥疹、固定型藥疹、紅皮病型藥疹、多形紅斑型藥疹、史蒂文.約翰綜合征等。過敏藥物主要有頭孢類、青霉素類、抗癲癇治療藥物、抗痛風藥。相關性分析發(fā)現(xiàn)淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞絕對數(shù)等與ALT有相關性，這說明免疫反應在藥疹肝損傷中可能起到重要作用。
　　2、血清補體蛋白指標
　　收集35例藥疹患者治療前和治療后出院時的血清及匹配健康對照血清，與健康對照者相比，藥疹

11、患者治療前血清補體蛋白C3a、C4a、C5a水平升高，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.832, P=0.008;t=2.257, P=0.031;t=2.495, P=0.018)；與治療前相比，藥疹患者治療后補體蛋白C3a、C4a、C5a水平顯著降低(t=3.213, P=0.003;t=2.728,P=0.010;t=4.772,P<0.001)，差異有統(tǒng)計學意義；治療后C3a、C4a、C5a表達水平高于健康對照組，但差別無統(tǒng)計學意義(t

12、=1.097, P=0.280;t=0.293, P=0.771;t=1.103,P=0.278)。通過相關性分析，發(fā)現(xiàn)補體C3a的表達水平與ALT呈正相關，這提示藥疹患者補體C3的降低可能是由于補體激活消耗，且補體激活可能在藥疹肝損傷中發(fā)揮重要作用。
　　3、血清細胞因子指標
　　收集研究期間35例藥疹患者血清，通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測藥疹患者和健康對照血清IL-22、IL-13的表達水平。藥疹病例組血清中I

13、L-22、IL-13高于健康對照組血清中IL-22、IL-13,差異有統(tǒng)計學意義(t=5.549,P<0.001；t=6.071, P<0.001)；藥疹病例組血清IFN-γ表達水平高于健康對照血清IFN-γ，兩組差異有統(tǒng)計學意義(Z=-2.992,P=0.003)；藥疹病例組血清IL-2、IL-4表達水平略高于健康對照組，兩組差異無統(tǒng)計學意義(Z=-0.396,P=0.692；Z=-0.649, P=0.516)；藥疹病例組血清TNF

14、-α、IL-6、IL-10、IL-17表達水平均高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(Z=-4.349,P<0.001；Z=-4.584,P<0.001；Z=-4.171, P<0.001；Z=-2.972,P=0.003)；
　　4、T細胞亞群分析結(jié)果
　　本次研究收集了30例藥疹患者和健康對照全血標本做流式分析，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，與健康對照相比，藥疹病例組外周血中CD4+T細胞比例下降，差異有統(tǒng)計學意義(t=-4.231;P

15、=0.001); CD8+T細胞比例有略微上調(diào)，差異無統(tǒng)計學意義(t=0.836; P=0.418)；CD4+T/CD8+T比值降低，差異有統(tǒng)計學意義(t=-3.134;P=0.008)。
　　對CD4+T細胞中不同輔助性T細胞亞群所占比例統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示：與健康對照相比，藥疹病例組外周血中Th1細胞亞群在CD4+T細胞中的比例明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義(t=4.648;P<0.001);Th2細胞亞群在CD4+T細胞中的比例差

16、異無統(tǒng)計學意義(t=-0.424;P=0.678)；藥疹病例組外周血中Th1/Th2比值明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.79;P=0.015);Th17細胞亞群在CD4+T細胞中的比例升高，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.866; P=0.013)；藥疹病例組中Th22細胞亞群在CD4+T細胞中的比例明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義(t=5.016;P<0.001)。
　　結(jié)論
　　1、藥疹患者體內(nèi)免疫功能的變化可能在藥疹肝損傷中發(fā)