COX-2和Heparanase-1在腎上腺腫瘤中的表達及臨床意義.pdf

1、研究背景:近年來隨著醫(yī)學科學技術的不斷發(fā)展，尤其是在影像學(CT、MRI等)和生化檢測手段的改進及人們健康體檢意識的不斷提高，腎上腺腫瘤的診斷率呈逐年上升趨勢。腎上腺腫瘤主要包括腎上腺皮質(zhì)腫瘤和腎上腺髓質(zhì)腫瘤，其中腎上腺皮質(zhì)腫瘤分為腎上腺皮質(zhì)腺瘤和腎上腺皮質(zhì)癌;腎上腺髓質(zhì)腫瘤分為良性嗜鉻細胞瘤、惡性嗜鉻細胞瘤、副神經(jīng)節(jié)瘤。在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中，腎上腺皮質(zhì)腺瘤預后較好，經(jīng)手術切除?？芍斡I上腺皮質(zhì)癌的惡性程度較高，侵襲性較強，早期確診率

2、不高，其治療仍以根治手術為主，缺乏有效的輔助治療，可早期出現(xiàn)肺、淋巴結、肝、骨等轉移，其年發(fā)病率大約為4～12/100萬，而5年生存率＜35％。據(jù)腎上腺皮質(zhì)癌的組織結構與形態(tài)和腎上腺皮質(zhì)腺瘤相像，因此鑒別腎上腺皮質(zhì)腫瘤的良、惡性比較困難，有時需結合它們的臨床表現(xiàn)、大體標本、影像學、鏡下病理組織學形態(tài)和免疫組化等進行綜合判斷。目前腎上腺皮質(zhì)腫瘤的發(fā)病機制尚不清楚，有時僅根據(jù)組織病理切片檢查難以判斷其良、惡性程度，從而給治療帶來了很大的困能

3、。
　　 目前嗜鉻細胞瘤的發(fā)病機制尚不清楚。至今腎上腺惡性嗜鉻細胞瘤的診斷仍是根據(jù)腫瘤侵及鄰近臟器或轉移至無嗜鉻組織的嗜鉻細胞而定。腫瘤細胞分化程度，如絲狀分裂活性，核酸多型性等均不適用于區(qū)別嗜鉻細胞瘤的良惡性。惡性嗜鉻細胞瘤診斷病理及影像學缺乏特異性指標，公認的金標準是在沒有嗜鉻細胞瘤的區(qū)域出現(xiàn)轉移灶。從臨床表現(xiàn)、影像學表現(xiàn)和組織病理學特點上去鑒別良、惡性腎上腺嗜鉻細胞瘤是非常困難的，目前沒有可靠的組織學或者生物標記物能鑒別良

4、、惡性腎上腺嗜鉻細胞瘤。
　　 COX-2(cyclooxygenese-2，環(huán)氧合酶-2):又稱前列腺素過氧化物合成酶，是前列腺素(PG)合成過程中一個重要的限速酶，可以將花生四烯酸代謝成各種前列腺素產(chǎn)物，從而在機體的生理和病理過程中發(fā)揮作用，并能通過促進細胞增殖、抑制細胞凋亡、促進腫瘤新血管形成、促進腫瘤細胞浸潤等途徑參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程。
　　 Heparanase-1(乙酰肝素酶-1，HPA-1):是一種作用

5、于細胞外基質(zhì)和基底膜，可在特定部位裂解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparansulfateproteoglycans，HSPGs)的葡萄糖苷酸內(nèi)切酶。HSPGs廣泛存在于各種組織的細胞表面、細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)和基底膜(basementmembrane，BM)中，是ECM和BM的重要構成成分糖氨聚糖的主要成分。腫瘤轉移所必須的兩個最重要的步驟是新生血管生成以及穿過基底膜和細胞外基質(zhì)。在腫瘤狀態(tài)下，H

6、eparanase-1具有促進腫瘤細胞侵襲、轉移和血管生成的作用。
　　 環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenese-2，COX-2)和乙酰肝素酶(heparanase-1，HPA-1)是近年來研究的熱點，已被大量研究表明，它們在人類大部分惡性腫瘤中呈高表達，如頭頸部惡性腫瘤、乳腺癌、結腸癌、胃癌、黑色素瘤以及前列腺癌、膀胱癌、腎癌等，并與腫瘤侵襲、腫瘤血管形成及預后相關。但目前關于COX-2和Heparanase-1在腎上腺皮

7、質(zhì)腫瘤發(fā)生發(fā)展中的可能的作用機制和它們是否可以成為早期鑒別腎上腺皮質(zhì)腫瘤的良惡性和判斷預后的可靠生物學指標，國內(nèi)外尚未見有報道。此外，關于COX-2和Heparanase-1在腎上腺嗜鉻細胞瘤中的表達及相關性，國內(nèi)外罕見有報道，有待進一步研究與探討。
　　 研究目的:1.探討COX-2和Heparanase-1在正常腎上腺、腎上腺皮質(zhì)腺瘤和腎上腺皮質(zhì)癌中的表達和臨床意義;2.探討COX-2和Heparanase-1在正常腎上腺，

8、腎上腺良性嗜鉻細胞瘤和腎上腺惡性嗜鉻細胞瘤中的表達和臨床意義;3.探討COX-2和Heparanase-1的表達在腎上腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用，以及了解它們是否可以成為早期鑒別腎上腺良、惡性腫瘤及判斷預后的可靠生物學指標，從而為腎上腺腫瘤的臨床鑒別診斷與治療提供新的手段。
　　 研究方法:1.選取1990年4月份～2010年12月份在廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院住院手術治療，且有完整的臨床、病理和隨訪資料的腎上腺皮質(zhì)腫瘤患者存檔石蠟標本

9、47例，其中腎上腺皮質(zhì)腺瘤33例，腎上腺皮質(zhì)癌14例。所有組織標本統(tǒng)一采用10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，組織切片厚度為2.5μm。另取健康腎移植供體正常腎上腺組織標本10例作為對照組。腎上腺皮質(zhì)腺瘤組中男性13例，女性20例;腎上腺皮質(zhì)癌組中，男性10例，女性4例。隨訪時間為126天～2319天。
　　 2.選取1990年4月份～2010年12月份在廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院住院手術治療，且有完整的臨床、病理和隨訪資料的腎上腺嗜鉻細胞瘤

10、存檔石蠟標本32例，其中腎上腺良性嗜鉻細胞瘤26例，惡性嗜鉻細胞瘤為6例。所有組織標本統(tǒng)一采用10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，組織切片厚度為2.5μm。另取健康腎移植供體正常腎上腺組織標本10例作為對照組。腎上腺良性嗜鉻細胞瘤組中男性16例，女性10例;腎上腺惡性嗜鉻細胞瘤組中，男性3例，女性3例。隨訪時間為403天～3721天。
　　 3.應用免疫組織化學NovolinkTMpolymer法檢測腎上腺腫瘤和正常腎上腺中COX-2

11、、Heparanase-1的表達。本實驗用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代—抗作陰性對照，以己知染色表達陽性的胃癌切片標本作為COX-2、Heparanase-1的陽性對照，最佳COX-2、Heparanase-1稀釋濃度均為1:200(稀釋劑為—抗稀釋液)。
　　 4.結果判斷:Heparanase-1與COX-2的表達主要定位于細胞漿，陽性表達呈淺黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。在排除非特異性染色前提下，由兩名經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師在不知臨

12、床和病理資料的情況下獨立觀察切片，對免疫組織化學結果進行評估。免疫組化結果根據(jù)著色陽性細胞數(shù)和染色強度分別評分。評估方法采用半定量積分法對染色結果進行判斷:隨機選取5個高倍視野進行計數(shù)，陽性細胞數(shù):0-5％計0分;6-25％計1分;26-50％計2分;51-75％計3分;76-100％計4分;陽性表達強度:無染色計0分，淡黃色計1分;棕黃色計2分;棕褐色計3分。兩種積分相乘，積分0分，為陰性(-);積分1-4分，為弱陽性(+);積分5-

13、8分，為中等陽性(++);積分9-12分，為強陽性(+++)。若判定結果相差3分，則重新判定。
　　 5.采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。所得數(shù)據(jù)陽性表達率的比較應用x2檢驗，采用Fisher，s確切概率法結合Bonfferoni方法進行率的多重比較，采用新的檢驗水準α=0.05/3=0.0167;檢驗各因素間的相關性用Spearmen等級相關分析進行;在進行Cox模型分析前，先用log-rank檢驗對單因素分析，然后選

14、擇單因素分析有統(tǒng)計學意義的變量進行Cox比例風險回歸模型分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 研究結果:1.腎上腺皮質(zhì)癌中COX-2和Heparanase-1的表達均明顯高于正常腎上腺和腎上腺皮質(zhì)腺瘤，表達差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167);COX-2和Heparanase-1在腎上腺皮質(zhì)腺瘤與正常腎上腺中的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.0167);COX-2與Heparanase-1在腎上腺皮質(zhì)腺瘤、腎上腺皮質(zhì)

15、癌中的表達均呈正相關(P＜0.05);COX-2與Heparanase-1的表達與腎上腺皮質(zhì)癌患者的預后有關(P＜0.05)，COX-2和Heparanase-1存在統(tǒng)計上的共線性問題，即二者反應相同的信息，用其一即可預測患者的預后，COX-2或Heparanase-1的表達越高，患者預后越差。
　　 2.惡性嗜鉻細胞瘤中COX-2的表達明顯高于腎上腺良性嗜鉻細胞瘤和正常腎上腺，表達差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167);惡性嗜

16、鉻細胞瘤中Heparanase-1的表達明顯高于腎上腺良性嗜鉻細胞瘤，表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)，與正常腎上腺中Heparanase-1的表達相比較，表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.0167);COX-2和Heparanase-1在腎上腺良性嗜鉻細胞瘤和正常腎上腺中的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.0167);COX-2和Heparanase-1在腎上腺良性嗜鉻細胞瘤和腎上腺惡性嗜鉻細胞瘤中的表達均呈正相關，它們的相關系數(shù)分