mba論文那曲冬蟲夏草菌株的分離、發(fā)酵及蟲草多糖免疫功能評(píng)價(jià)pdf

1、分類號(hào)：0 9 3 9 ．9密 級(jí)： 公玨單位代碼：學(xué) 號(hào)：1 0 0 8 62 0 1 2 0 8 1那曲冬蟲夏草菌株的分離、發(fā)酵及蟲草多糖免疫功能評(píng)價(jià)S e p a r a t i o n 、f e r m e n t a t i o no f C o r d y c e p ss t r a i n sf r o mN a q u a n d e v a l v a t i o no f i m m u n o l o g i c

2、 a l C o r d y c e p sP o l y s a c c h a r i d e學(xué)位申請(qǐng)人：郭潔指導(dǎo)教師：袁洪水 副教授朱寶成教授學(xué)科專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一五年五月三十日摘要冬蟲夏草是一種名貴中藥材，由于其特殊生長(zhǎng)條件，加之人們的過(guò)度采挖，造成冬蟲夏草這一珍稀資源更加缺乏。本研究旨在得到一株高產(chǎn)多糖的冬蟲夏草菌株來(lái)擴(kuò)展這一珍貴資源。對(duì)采自西藏那曲地區(qū)高山草甸的新鮮

3、冬蟲夏草子實(shí)體進(jìn)行分離，得到5 0 株大小、形狀、顏色各異的菌株，運(yùn)用插片法觀察菌絲體和孢子形態(tài)特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)，C C 一2 、C C 一3 、C C 一4 、C C 一5 、C C 一9 、C C —1 0 菌株的菌絲和孢子形態(tài)與蟲草菌株結(jié)構(gòu)相似。經(jīng)分子生物學(xué)鑒定C C 一2 菌株與擬青霉( S i m p l i c i l l i u m s p ) 的相似性為9 7 ．8 0 ％，C C 一3 與枝孢菌( C l a d o s p

4、o r i u m s p ) 的相似性高達(dá)1 0 0 ％，C C 一4 菌株與麥角菌( C l a v i c i p t i t a c e a es p )的相似性為9 9 ．7 6 ％，C C 一5 菌株與黑粉菌( U n c u l t u r e d u s t i l a g o ) 的相似性為9 9 ．8 3 ％，C C 一9 菌株與黑粉菌( U s t i l a q i n o i d e av i r e n s

5、) 的相似性高達(dá)1 0 0 ％，C C 一1 0 菌株與輪枝菌屬( V e r t i c i l l i u ms p ) 的相似性為9 7 ．1 7 ％。選取菌落潔白、生長(zhǎng)旺盛、菌絲健壯的分離菌株C C 一3 進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化，單因素和正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，以蛋白胨為氮源，多糖含量為0 ．6 8 6g ／L ，以麥芽糖為碳源，多糖含量最高為0 ．7 8 6 g ／L 。采用正交試驗(yàn)，最優(yōu)無(wú)機(jī)鹽配比為K H 2 P 0 4 —

6、0 ．1 g 、M g S 0 4 0 ．0 5g 、Z n S 0 4 0 ．0 5g 時(shí)，多糖含量可達(dá)1 ．5 5 0 g ／L 。最優(yōu)發(fā)酵條件為發(fā)酵溫度為3 0 ℃，接種量為1 0 ％，多糖含量最高，可達(dá)2 ．1 8 0 ∥L 。以C C 一3 菌株為試驗(yàn)材料，以多糖得率為指標(biāo)，正交試驗(yàn)比較熱水浸提法和超聲波輔助熱水浸提法提取蟲草胞內(nèi)多糖工藝研究，熱水浸提法的最優(yōu)條件為提取溫度9 0 ℃，料液比1 ：3 0 ，時(shí)間6 0 m i

7、n ，提取次數(shù)4 次，多糖得率為2 ．2 6 5 ％。超聲波輔助熱水浸提法提取多糖的最優(yōu)條件為開停時(shí)間3 ：7 ，超聲時(shí)問9 0r a i n ，超聲次數(shù)4 次，多糖得率最高為6 ．6 1 9 ％。后者比前者多糖得率高2 ．9 倍。以C C ．3 菌株為供試菌株，5 0 只肉雞為試驗(yàn)材料，隨機(jī)分成3 組，對(duì)照組、1 ％劑量添加組和2 ％劑量添加組。對(duì)其進(jìn)行免疫器官指數(shù)、H ．E 免疫組織切片染色和腸道微生物菌群的研究。從試驗(yàn)結(jié)果看，7

8、—1 4 d 時(shí)試驗(yàn)組與對(duì)照組，胸腺生長(zhǎng)緩慢，2 ld 時(shí)生長(zhǎng)迅速，2 8 d 開始胸腺指數(shù)有所降低，胸腺開始退化。法氏囊3 5 d 后開始退化，試驗(yàn)組與對(duì)照組差異顯著( P < O ．0 5 ) ，明顯降低了胸腺和法氏囊的退化程度。脾臟一直在增加，試驗(yàn)組與對(duì)照組差異顯著，試驗(yàn)組脾臟指數(shù)明顯增加。H E 切片可以看出，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的脾臟和法氏囊均無(wú)明顯變化，切片組織正常。對(duì)照組脾臟紅、白髓界限不明顯，周圍淋巴鞘也不明顯，添