蔗糖濃度對(duì)secc菌斑生物膜s.mutans致齲性及gtfs基因表達(dá)的影響

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文蔗糖濃度對(duì)S-ECC菌斑生物膜S.mutans致齲性及GTFs基因表達(dá)的影響姓名：李文卿申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：趙瑋20080508蔗糖濃度對(duì)S - E C C 菌斑生物膜& m u t a n s 致齲性及G T F s 基因表達(dá)的影響材料與方法：①選取中山大學(xué)北校區(qū)幼兒園6 7 名3 —5 歲兒童作為研究對(duì)象，分為S ．E C C 組( n = 3 5 ) 、無(wú)齲組( n ．3 2

2、) ，采集牙面菌斑，以U A l 5 9 標(biāo)準(zhǔn)菌株作為對(duì)照組，通過(guò)應(yīng)用T Y C S B 選擇性培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察、生理生化鑒定的方法進(jìn)行篩選，獲得純化的變鏈菌株。②將純化的菌株用P B S 緩沖液制備成菌濃度為O D 6 0 0 = 0 ．1 的菌液，按照體積L L l ：1 0 0 ，接種至蔗糖濃度分別為l ％、5 ％、1 0 ％及2 0 ％的P Y G 液體培養(yǎng)基，厭氧培養(yǎng)1 8 d x 時(shí)( 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期) ，將菌液離心，

3、取上清液，以精密p H 計(jì)測(cè)變鏈茵產(chǎn)酸能力；菌沉淀以P B S 緩沖液重懸，分光光度儀測(cè)定O D 6 0 0 值，評(píng)價(jià)其生長(zhǎng)情況；葸酮法測(cè)定水不溶性葡聚糖( W a t e r I n s o l u b l eG l u c a n s ，W I G ) 的量；比濁法測(cè)定變鏈菌的粘附比值，以分析不同濃度蔗糖作用下變鏈菌株的致齲性。③選取合成W I G 能力不同的臨床分離菌株1 8 株，提取細(xì)菌總R N A ，半定量R T - P C

4、R 分析不同濃度蔗糖作用下g t f B 及g t f C 基因表達(dá)情況。④提取變鏈菌基因組D N A ，采用A P ．P C R 的方法，分析g t f B 及g t f C 不同表達(dá)水平變鏈菌株的基因型。結(jié)果：①變鏈菌在S - E C C 組及無(wú)齲組中的檢出率分別為9 2 ．4 ％及6 2 ．5 ％，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( po ．0 5 ) i 合成W I G 能力強(qiáng)的S ．E C C 組變鏈菌株g t f B 及垂f C 表達(dá)水平高

5、于無(wú)齲組。@ A P —P C R 結(jié)果顯示，從2 0 個(gè)變鏈菌株中共檢測(cè)出1 5 種不同的基因型，其中g(shù) t f 高表達(dá)組發(fā)現(xiàn)8 種基因型，g t f 低表達(dá)組為6 種，同時(shí)有4 對(duì)G T F s 表達(dá)水平相近菌株的基因型一致。結(jié)論：①S ．E C C 中分離得到的變鏈菌株致齲性顯著高于無(wú)齲者，S - E C C 的發(fā)生與變鏈菌在兒童牙菌斑中的定植比例及高致齲性的變鏈菌株密切相關(guān)。②變鏈菌株的致齲能力與蔗糖濃度有關(guān)，隨蔗糖濃度升高，變