血管緊張素ⅱ受體1a亞型細(xì)胞外第二環(huán)肽段在e.coli中的表達(dá)和純化

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管緊張素Ⅱ受體1A亞型細(xì)胞外第二環(huán)肽段在E.coli中的表達(dá)和純化姓名：劉迎旭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：循環(huán)生理學(xué)指導(dǎo)教師：劉慧榮;王偉2003.5.10生墮墾型查堂 堡圭蘭堡壘奎! ! 嬰化到E ．c o l iB L 2 1 ( D E 3 ) 中，I P T G 誘導(dǎo)表達(dá)，聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定重組質(zhì)粒能否表達(dá)目的蛋白，對(duì)表達(dá)可溶性蛋白的重組質(zhì)粒進(jìn)行核酸序列測(cè)定。經(jīng)過(guò)G l u t a t h i o n

2、eS e p h a r o s e4 B 親和層析柱純化，進(jìn)一步鑒定并篩選重組表達(dá)質(zhì)粒。用T h r o m b i n 消化G S T ( 谷胱甘膚轉(zhuǎn)移脅) 融合蛋白，G l u t a t h i o n e S e p h a r o s e4 B 親和層析柱除去G S T ，從而得到目的肽段。結(jié)果：1 成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體p G E X 4 T 一1 一A T ，。，p E T 2 2 b —A T l 。，p Q E 3

3、1 - A T I A 和p G E X 6 P 一1 ·A T ?2 ．I ：P T G ( 終濃度為0 ．0 5 m M ) 1 6 。C 誘導(dǎo)1 4 h ，p G E X 4 T —l —A T l A 在E ．c o l i B L 2 1 ( D E 3 ) 中，表達(dá)可溶性G S T 融合蛋白。3 G l u t a t h i o n eS e p h a r o s e4 B 親和層析柱純化，得到純度較高的G S

4、 T融合蛋白。4 T h r o m b i n 能夠切開(kāi)G S T 融合蛋白，G l u t a t h i o n eS e p h a r o s e4 B 親和層析柱分離G S T 和重組目的肽段，目的肽段的表達(dá)量約為2 ．0 m g ／L 。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)利用基因工程技術(shù)得到A T ，。受體細(xì)胞外第二環(huán)肽段，為制備抗A T 。。受體細(xì)胞外第二環(huán)肽段多克隆抗體奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：血管緊張素Ⅱ受體；肽段；E ．c o l i ；表達(dá)；