淡紫擬青霉菌paecilomyceslilacinus(thom.)samsonstr.nhpl03生物學(xué)特性與次生代謝物質(zhì)生物效應(yīng)研究

1、V 7 7 4 9 4 7分類號(hào)：8 4 6 7密級(jí)：福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文單位代碼：1 0 3 8 9學(xué) 號(hào)：2 0 1 0 3 0淡紫擬青霉菌( P a e c i l o m y c e s l i l a c i n u s ( T h o n l ．) S a I l l s o nS t r ．N H - P L 一0 3 ) 生物學(xué)特性與次生代謝物質(zhì)生物效應(yīng)研究學(xué)科專業(yè)：研究方向：研究生：指導(dǎo)教師：完成時(shí)間：農(nóng)業(yè)昆蟲與害

2、蟲防治生物農(nóng)藥與害蟲綜合治理李 芳陳家驊 教授二o o 五年四月摘要摘要系統(tǒng)測(cè)定了淡紫擬青霉N H ．P L - 0 3 菌株液體培養(yǎng)過程O D ( 6 2 0 n m ) 值、p H值、菌絲干重、產(chǎn)孢量以及基質(zhì)消耗( 碳、氮) 等培養(yǎng)參數(shù)；對(duì)培養(yǎng)因子進(jìn)行了相關(guān)分析和主成分分析：并對(duì)該菌株的培養(yǎng)階段進(jìn)行了聚類分析。研究結(jié)果表明：菌絲干重、產(chǎn)孢量、O D ( 6 2 0 n m ) 值分別為營養(yǎng)生長、生殖生長、生理特性主成分：基質(zhì)消耗(

3、C 、N ) 與產(chǎn)物生成有顯著相關(guān)；當(dāng)凈2 ．5 8 2 時(shí)?？蓪⒌蠑M青霉菌株N H —P L ．0 3 培養(yǎng)過程分為4 個(gè)階段，第一階段為適應(yīng)期，培養(yǎng)時(shí)間為l ~ 2 d ．菌的培養(yǎng)參數(shù)變化不大；第二階段為生睦期，培養(yǎng)時(shí)間為3 ～5 d ，菌體開始生長，O D ( 6 2 0 n m ) 值上升．p H 值下降，菌絲和產(chǎn)孢量增加；第三階段為對(duì)數(shù)期，培養(yǎng)時(shí)間為6 - 一7 d ．O D ( 6 2 0 n m ) 值、p H 值上升，

4、菌絲和產(chǎn)孢量急劇增加：8 d 后進(jìn)入穩(wěn)定期( 第四階段) ，O D ( 6 2 0 n m ) 值、p H 值趨丁穩(wěn)定．菌絲干重平| I 產(chǎn)孢量達(dá)到峰值并趨于穩(wěn)定。對(duì)淡紫擬青霉培養(yǎng)過程P O D 同工酶進(jìn)行跟蹤測(cè)定．結(jié)果表明：在淡紫擬青霉的整個(gè)液體培養(yǎng)過程中，共出現(xiàn)了4 條P O D 同工酶酶帶。其遷移率( R f ) 分別為0 ．0 9 8 、0 ．1 3 7 、0 ．2 9 4 和0 ．3 7 3 ?？傮w上，培養(yǎng)過程P O D 同工

5、酶酶帶的數(shù)量呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢(shì)。3 ～5 d 時(shí)有3 條P O D 同工酶酶帶，培養(yǎng)至6 d ，只有2 條酶帶．7 ～1 0 d 都只有l(wèi) 條P O D 同工酶酶帶。對(duì)培養(yǎng)過程B ．葡萄糖營酶活性進(jìn)行跟蹤分析，結(jié)罘表明：在培養(yǎng)的第1 , , - 6 d時(shí)，B 一葡萄糖苷酶活性的變化比較平緩，酶活的變化為7 ．0u ／m L ～9 ．4 3 8u ／m L ，從培養(yǎng)的第7 d 開始B ．葡萄糖苷酶活性驟然升高，達(dá)到4 3 ．8 7 5u

6、／m L ，培養(yǎng)8d 時(shí)。B ．葡萄糖苷酶活性達(dá)到最高值5 5 ．0u ／m L ，隨后，p 葡萄糖苷酶活性呈動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)( 9 ~ l l d ) ，1 2 d 時(shí)開始呈現(xiàn)逐漸下降的穩(wěn)定變化，從4 4 ．4 3 8u ／m L 降至1 8 ．8 7 5u ／m L 。對(duì)培養(yǎng)過程的可溶性蛋白進(jìn)行電泳分析。結(jié)果表明：在l ～1 2 d 的培養(yǎng)過程中．蛋白質(zhì)條帶吊現(xiàn)先增多．后減少，再增多的趨勢(shì)。并且各個(gè)階段存在著共同的蛋白質(zhì)電泳條帶，這反映

7、了淡紫擬青霉液體培養(yǎng)過程中基因表達(dá)的情況。研究淡紫擬青霉菌在不同培養(yǎng)基上的生長特性，結(jié)果表明：不同培養(yǎng)基對(duì)淡紫擬青霉N H ．P L ．0 3 菌株培養(yǎng)過程的O D 值，p H 值，菌絲生長與孢子生成有明顯影響。孟加拉紅、P D A 和察氏培養(yǎng)基菌絲鼉?cè)鲩L雖為顯著，培養(yǎng)8 d ，菌絲最分劃達(dá)到0 ．8 0 9 ／5 0 m L 、0 ，7 3g ／5 0 m L 和0 ．7 0 9 ／5 0 m L ；P D B 、P C A 培養(yǎng)基茁