芋螺毒素的基因克隆、表達及分離純化的研究.pdf

1、芋螺毒素(conotoxins，CTx)是近年來國際上的一個研究熱點。它是肉食性軟體動物芋螺(conus)分泌出來的能特異性作用于體內各種離子通道及神經受體的生物活性多肽化合物，通常是由10-46個氨基酸殘基組成，具有分子量小、結構多樣、富含半胱氨酸、作用靶點廣泛、功能專一、組織特異性強等特點。目前發(fā)現(xiàn)的芋螺毒素超家族主要有A-，T-，O-，M-，P-，I-和S-超家族等，它們既可以作為體內一些具有重要生理功能靶點的探針和“解密器”，也

2、可被直接開發(fā)成為藥物或作為新藥的先導化合物，因此對芋螺毒素的研究有重要的理論和實際意義。 本文利用RACE方法從大理石芋螺(C.marmoreus)和花瑪瑙芋螺(C.achatinus)克隆得到A-超家族芋螺毒素κA-Ac4.1a/b，O-超家族芋螺毒素Mr6.1和T-超家族芋螺Mr5.2，并對之進行序列分析。從大理石芋螺中分離純化得到3個新的芋螺毒素mr5.2，mr3.5和mr3.6，并對它們進行質譜鑒定和氨基酸序列測定。其中

3、mr5.2屬于T-超家族芋螺毒素，有翻譯后加工的形式存在，兩個Glu被加工成γ-羧基谷氨酸(Gla)，推測Gla可能對芋螺肽的折疊起著重要的作用。分離得到的mr3.5和mr3.6具有CC-C-C-CC的半胱氨酸骨架排列方式，但與先前發(fā)現(xiàn)的M-超家族芋螺毒素(μ-、ψ-和κM-芋螺毒素)存在顯著差異，分子明顯偏短，在第三個loop只有1個氨基酸，同時也沒有類似于mr3a中的GC(_x)PCmotif結構存在，推測mr3.5和mr3.6可能