ε蛋白激酶c在佛波醇酯抑制kir2.3電流中的作用

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文ε蛋白激酶C在佛波醇酯抑制Kir2.3電流中的作用姓名：王麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：張海林20050301中 文 摘 要c R N A o ( 2 )非洲爪蟾卵 母細(xì)胞的分離:在爪蛤冰凍麻醉狀態(tài)下， 下腹部 取H I 非 洲爪蟾卵 母細(xì)胞。 在含 2 m g / m l 膠原酶的O 凡液中 振蕩消化 1 . 5 - 2 小時(shí)。 待 細(xì)胞消 化為單細(xì) 胞后 用N D 9 6 液清洗細(xì)胞。 ( 3

2、 ) 非洲爪蟾卵母細(xì)胞的R N A注射: 按每 個(gè) 非 洲爪 蟾卵 母 細(xì) 胞0 . 5 - 1 n g / 5 0 n l 注 射， 注 射 后的 細(xì)胞在含 2 . 5 m M 丙酮酸鈉的N D 9 6 中 1 9 - 2 0 ' C 培養(yǎng)。 ( 4 ) 用雙電極電 壓 鉗 ( t w o - m i c r o e l e c t r o d e v o l t a g e c l a m p , T E V C

3、 ) 方 法檢i O jK i r 2 . 3 通道在非洲爪蟾卵母細(xì)胞中的表達(dá)情況和電流特征。結(jié)果:( 1 )質(zhì)粒 D N A的酶切線性化電泳分析:用合適的限制性核酸內(nèi) 切酶在插入片斷的下 游將環(huán)狀的質(zhì)粒 D N A線性化， 用常規(guī)瓊脂糖凝膠電 泳分析線性化結(jié)果。 ( 2 ) 休外轉(zhuǎn)錄 R N A的電泳分析:用甲 醛和去離子甲 酞胺共同作月 } 使R N A變性以 破壞其二級(jí)結(jié)構(gòu)， 瓊脂糖凝膠電泳方法可得到一條清晰的 R N A 條帶。

4、( 3 )電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)果:向非洲爪蟾卵母細(xì)胞注射 R N A后的第2 -3 天， 即可用 T E V C方法檢測(cè)到K i r 2 . 3 電流。觀察電流幅度較大的高鉀情況下的一 8 0 m v時(shí)的電 流， + 8 0 m V時(shí)的電 流為對(duì)照。結(jié) 論:以 非洲爪蟾卵 母細(xì)胞為表 達(dá)系 統(tǒng)， 將休外轉(zhuǎn)錄得來的 R N A 以微注射方式注入非洲爪蟾卵母細(xì)胞可表達(dá)K i r 2 . 3 通道。用雙電 極電壓鉗方法可觀察非洲爪蟾卵 母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)