‘東魁’楊梅(myricarubracv.dongkui)兩個(gè)變異材料的發(fā)掘及鑒定

1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文密級(jí)：‘東魁’楊梅( M y r i c a r u b r aC V ．D o n g k u i ) 兩個(gè)變異材料的發(fā)掘及鑒定E x p l o i t a t i o na n d I d e n t i f i c a t i o no f T w o M u t a n t s i n‘D o n g k u i ’C h i n e s eB a y b e r r y ( M r l U C

2、A R U B R A )博士研究生： 陳方永學(xué) 號(hào)： 2 0 1 1 3 0 5 0 3 9 0 0 2指導(dǎo)教師： 劉繼紅教授指導(dǎo)小組： 羅正榮教授彭抒昂教授李國(guó)懷教授胡春根教授伊華林教授專業(yè)：果樹學(xué)獲得學(xué)位名稱：農(nóng)學(xué)博士研究方向：果樹種質(zhì)資源獲得學(xué)位時(shí)間：2 0 1 4 年1 2 月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝林學(xué)學(xué)院二。一四年十二月‘東魁’楊梅( M y r i c a r u b r a C V ．D o n g k u i ) 兩個(gè)變異材

3、料的發(fā)掘及鑒定摘要‘東魁’楊梅( M y r i c ar u b r a C V ．D o n g k u i ) 源于實(shí)生變異，單果重量超出同類果實(shí)的1 ．5 倍，但交替結(jié)果、裂果、腐爛、抗枯枝病的問(wèn)題較其它品種更為嚴(yán)重。倘若有綜合性狀優(yōu)越于母本的種質(zhì)，并對(duì)其變異機(jī)理進(jìn)行系統(tǒng)研究，具有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。本研究以兩個(gè)‘東魁’楊梅變異體D B l 、D B 2 為供試材料，從形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等方面比較了它們與野生型東魁的差別

4、并進(jìn)行系統(tǒng)分析。主要研究結(jié)果如下：1 、利用形態(tài)檢測(cè)法對(duì)供試對(duì)象的花、葉、枝、果等組織器官進(jìn)行檢測(cè)。分析供試材料花期，D B l 分別早于D B 2 3 d 、遲于東魁3 d 左右。兩個(gè)變異材料的花須、花萼、花序、花枝、葉片、果實(shí)、氣孔與東魁有顯著差異。成熟期D B l 和D B 2 單果質(zhì)量分別為2 5 ．3 9 、2 8 ．3 9 ，大于東魁為2 0 ．5 9 。流式細(xì)胞儀倍性分析和染色體數(shù)目表明，D B l 和D B 2 均為四倍

5、體( 2 n = 4 x = 3 2 ) ，東魁( D K ) 為2 n = 2 x = 1 6 ，即為二倍體。2 、利用i P B S 和S c o T 分子標(biāo)記，檢測(cè)3 1 份楊梅材料及與‘東魁’的親緣關(guān)系。在7 8 條引物中篩選3 8 條，可重復(fù)條帶4 5 2 條，多態(tài)性較好的4 0 1 條，多態(tài)率為8 8 ．7 ％。根據(jù)P C R 擴(kuò)增結(jié)果，它們的遺傳相似系數(shù)分布在0 ．5 5 ．0 ．9 4 ，大部分集中在0 ．6 3 ．0

6、．8 0之間，以O(shè) ．7 0 為閾值，可將其分為3 組。D B l 、D B 2 的G S 分別為0 ．7 7 、O ．8 0 ，親緣關(guān)系較近。細(xì)葉高莊與賈宅早的G S 均為O ．9 4 ，可能是同物異名。臨海陽(yáng)平梅G S值為0 ．5 5 ，親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。3 、利用T R - F R E T 法檢測(cè)兩個(gè)變異材料果實(shí)中C y ．3 一g l u 、總酚、類黃酮等物質(zhì)含量。結(jié)果顯示，成熟期C y ．3 ．g l u 含量最高，D B l 、

7、D B 2 的含量顯著高于‘東魁’。進(jìn)一步對(duì)D B l 、D B 2 和‘東魁’分別在兩個(gè)發(fā)育階段( 幼果、成熟果) 的果肉R N A 構(gòu)建6個(gè)文庫(kù)，進(jìn)行R N A —S e q ，分別獲得3 7 0 8 8 0 9 ( D B l ．1 ) 、3 6 0 6 3 5 8 ( D B l ．2 ) 、3 5 7 5 1 1 9( D B 2 ．1 ) 、3 7 8 7 8 9 5 ( D B 2 ．2 ) 、3 6 1 0 9 5 4

8、( 東魁1 ) 、3 5 9 4 7 4 2 ( 東魁2 ) 條有效序列。與參考數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，分別鑒定了2 8 4 0 7 ( D B l ．1 ) ，2 8 0 4 0 ( D B l ．2 ) ，2 8 0 4 3 ( D B 2 ．1 ) ，2 2 2 5 6 ( D B 2 ．2 ) ，2 8 6 8 3 ( 東魁1 ) ，2 7 3 5 1 ( 東魁2 ) 個(gè)基因。以F D R _ < 0 ．0 0 1 且倍數(shù)差異在2 倍

9、以上的基因定義為差異基因，D B l 與‘東魁’間差異表達(dá)基因有2 8 1 個(gè)，其中1 2 3 個(gè)和1 5 8 個(gè)基因分別上調(diào)和下調(diào)表達(dá)；D B 2 和‘東魁’間差異表達(dá)的基因有4 7 個(gè)，其中有8 個(gè)和3 9 0 個(gè)基因分別上調(diào)和下調(diào)表達(dá)。利用R e a l ．t i m eP C R 分析8 個(gè)功能基因( 脅Ⅵ1 G 丁、M r F 3 ' H 、M r D F R l 、M r C H S 、M r C H l 、M r