mtorcdc42信號(hào)通路在pm2.5加劇慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能障礙中的作用及機(jī)制研究

1、分類號(hào)： 分類號(hào)：R563.3 R563.3 密級(jí)： 密級(jí)：公開 公開專 業(yè) 學(xué) 位 研 究 生 學(xué) 位 論 文論文題目（中文 論文題目（中文）mTOR-Cdc42 信號(hào)通路在 PM2.5 加劇慢性阻塞 性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能障礙中的作用及機(jī)制研究論文題目（外文 論文題目（外文）Effects and mechanisms of mTOR-Cdc42signaling pathway on PM2.5 deterioratio

2、n of impaired phagocytosis of AM in chronicobstructive pulmonary disease mice研 究 生 姓 名 研 究 生 姓 名 黨苗苗學(xué) 位 類 別 學(xué) 位 類 別 臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)碩士學(xué)位專 業(yè) 學(xué) 位 領(lǐng) 域 專 業(yè) 學(xué) 位 領(lǐng) 域 內(nèi)科學(xué)呼吸病學(xué)學(xué) 位 級(jí) 別 學(xué) 位 級(jí) 別 碩士導(dǎo)師姓名、職稱 導(dǎo)師姓名、職稱 劉曉菊 教授論文工作起止年月 論文工作起止年月 2014

3、年 10 月至 2016 年 4 月論 文 提 交 日 期 論 文 提 交 日 期 2016 年 4 月論 文 答 辯 日 期 論 文 答 辯 日 期 2016 年 5 月學(xué) 位 授 予 日 期 學(xué) 位 授 予 日 期 2016 年 6 月校址：甘肅省蘭州市 校址：甘肅省蘭州市ImTOR-Cdc42 mTOR-Cdc42 信號(hào)通路在 信號(hào)通路在 PM2.5 PM2.5 加劇慢性阻塞性肺疾病小鼠 加劇慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功

4、能障礙中的作用及機(jī)制研究 肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能障礙中的作用及機(jī)制研究中文摘要 中文摘要目的 目的：探討哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白-細(xì)胞分裂周期蛋白（mTOR-Cdc42）信號(hào)通路在 PM2.5 加劇慢性阻塞性肺疾病 （慢阻肺） 小鼠肺泡巨噬細(xì)胞(AM)吞噬功能障礙中的作用及機(jī)制。方法 方法： 將 50 只 SPF 級(jí)雄性 8 周齡 BALB/c 小鼠， 采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照（A）組、慢阻肺（B）組、PM2.5 慢阻肺（C）組、表沒食

5、子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）慢阻肺（D）組、EGCG+PM2.5 慢阻肺（E）組，每組 10 只。采用單純香煙煙霧持續(xù)暴露 90d 建立慢阻肺小鼠模型。采集蘭州市城關(guān)區(qū)大氣中的PM2.5，C 組和 E 組給予 PM2.5(720?g/m3)持續(xù)霧化吸入 90d，A 組、B 組和 D 組給予同等體積的生理鹽水霧化吸入。采用不連續(xù)密度梯度離心法分離小鼠 AM，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為 2×106/ml，D 組和 E 組 EGCG 終濃度為

6、40μmol/L，孵育 24h。采用小鼠無創(chuàng)體描箱檢測肺功能，處死小鼠，取左肺下葉，行病理學(xué)檢查。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測 AM 吞噬異硫氰酸熒光素標(biāo)記的大腸桿菌（FITC-E.coli）的能力。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和蛋白印跡法（WB）檢測 mRNA 及蛋白的表達(dá)。采用小 G 蛋白活性檢測（G-LISA）試劑盒檢測 Cdc42 的活性。采用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞骨架。結(jié)果 結(jié)果:（1） 慢阻肺模型的肺功能及肺組織病理

7、學(xué)改變： B組吸氣峰流速 （PIF） 、呼氣峰流速（PEF）和呼出 50%潮氣量時(shí)的流速（EF50） （7.5±1.0、4.67±0.6、3.29±0.43） 顯著低于 A 組 （11.61±1.12、 7.63±0.44、 5.05±0.37） （均 P<0.01） ；C 組（4.96±0.91、3.34±0.48、2.14±0.29）顯著

8、低于 B 組（均 P<0.01） 。C組小鼠肺組織中可見明顯的支氣管炎癥和肺氣腫改變，較 B 組程度嚴(yán)重，A 組小鼠肺組織無此病理改變。（2）AM 的吞噬功能：B 組平均熒光強(qiáng)度（MFI）和吞噬 FITC-E.coli陽性細(xì)胞百分比 （吞噬%） （4060±590、 28.65±1.26） 顯著低于 A 組 （9190±988、67.50±4.56） （均 P<0.01） ； C 組（

9、2932±700、18.41±1.48）顯著低于 B 組 （均P<0.01） ； D 組 （5046±732、 39.07±1.33） 顯著高于 B 組 （均 P<0.01） ； E 組 （4018±578、28.14±1.35）顯著高于 C 組（均 P<0.01） 。(3) AM mTOR mRNA、蛋白及活性（p- mTOR） ：B 組 mTOR mRNA