載脂蛋白e4神經(jīng)毒作用機(jī)制的研究：k39;通道抑制和ca39;2超載

1、山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文載脂蛋白E4神經(jīng)毒作用機(jī)制的研究：K通道抑制和Ca超載姓名：秦穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師：?jiǎn)探√?祁金順20040614山西醫(yī)科走羋博士學(xué)位論文憶等。如果K + 通道確系a p o E 4 的靶點(diǎn)之一，其通道性質(zhì)和動(dòng)力學(xué)特征發(fā)生了哪些變化? 保護(hù)K + 通道是否可以減輕a p o E 4 引起的C a ”超載和其它毒性作用?本研究利用膜片鉗技術(shù)，在單通道和全細(xì)胞水平觀察了急性給與a p o E

2、4 對(duì)大鼠海馬C A 1 區(qū)神經(jīng)元K + 離子電流的影響；并結(jié)合鈣離子熒光成像手段觀察了a p o E 4 X } [ C a 2 + ] i 的影響，探討了a p o E 4 引起C a 2 + 超載的膜途徑以及K + 通道和( C a 2 + 】．之間可能的聯(lián)系。第一部分：載脂蛋白E 4 對(duì)海馬神經(jīng)元延遲整流r 通道單通道特性的影響在多種不同的電壓門(mén)控K + 通道中，由于延遲整流K + 通道( d e l a y e d ．r e

3、c t i f i e rp o t a s s i u m c h a n n e l s ，I k c h a n n e l s ) 具有去極化激活和外向整流的特性，對(duì)動(dòng)作電位的復(fù)極化以及終止動(dòng)作電位期間C a ”的內(nèi)流起到促進(jìn)作用；在技術(shù)上，I k 的研究不需要對(duì)其它的電流成分進(jìn)行藥理學(xué)阻斷：并且，在內(nèi)面向外式( i n s i d e —o u t ) 膜片上更容易表現(xiàn)a p o E 4 的細(xì)胞內(nèi)直接作用。因此，我們首先選擇內(nèi)

4、面向外式膜片上的I t 單通道作為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1 ) 實(shí)驗(yàn)中記錄到的電導(dǎo)為3 5p S 通道的活動(dòng)由去極化所激活，其活動(dòng)隨胞膜去極化的程度增加而增強(qiáng)，該通道的活動(dòng)不受胞外C a 2 + 濃度的影響，但能夠被2 0 m m o t ／LT E A 可逆性的阻斷，結(jié)合以往的研究，該電導(dǎo)為3 5p S 通道屬于I k 通道；2 ) 膜片胞漿側(cè)給予0 5 p ．m o l ／La p o E 4 可以顯著地抑制T 。電流：其開(kāi)放概牢

5、、開(kāi)放頻率及開(kāi)放時(shí)間的抑制幅度分別為9 7 5 84 - 7 ．9 3 ％、9 86 64 - 3 ．0 l ％及5 l 5 54 - 4 ．5 0 ％，而關(guān)閉時(shí)間則延長(zhǎng)了1 38 94 - 2 ．6 8 倍( n = 1 0 ，P < 0 ．0 1 ) ，a p o E 4 對(duì)I k 單通道電流的抑制作用是可逆的；3 ) 作為x , ／J 豫，在同樣的實(shí)驗(yàn)條件和同樣的摩爾濃度下，載脂蛋白a p o A ( 存在于腦脊液和老年斑中