細(xì)胞凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 山東大學(xué)

1、山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2013年9月30日科目細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題目細(xì)胞凝集反應(yīng)第1頁共4頁細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告細(xì)胞凝集反應(yīng)細(xì)胞凝集反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.1.了解細(xì)胞膜的表面結(jié)構(gòu)；2.2.掌握凝集素促使細(xì)胞凝集的原理；3.3.學(xué)習(xí)研究細(xì)胞凝集反應(yīng)的方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】1.1.凝集素凝集素凝集素是一類含糖（少數(shù)例外）并能與糖轉(zhuǎn)移結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。目前已發(fā)現(xiàn)近千種植物中含有凝集素，在各種真菌、無脊椎動(dòng)物、脊椎動(dòng)物，人體的各種

2、組織和器官中及某些病毒體內(nèi)也含有凝集素，在各種真菌、無脊椎動(dòng)物、脊椎動(dòng)物，人體的各種組織和器官中及某些病毒體內(nèi)也含有凝集素。常用的為植物凝集素，通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麥胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他們的總稱。在細(xì)胞表面，組成細(xì)胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖鏈，形成細(xì)胞外被（又稱為糖萼）。凝集素能與細(xì)胞外被中的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”，從而引起細(xì)胞凝集。凝集素引起的血細(xì)胞凝集，其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生變

3、化，與血液凝固中發(fā)生的復(fù)雜生物化學(xué)過程完全不同；另外，凝集素能與不同的糖蛋白特異結(jié)合，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集，但是凝集素不是來源或參與免疫反應(yīng)的產(chǎn)物，因此，Ponder提出應(yīng)稱“凝集素組織化學(xué)”而不能稱為“凝集素免疫組織化學(xué)”。人們利用凝集素與不同的糖蛋白特異性結(jié)合的原理，識別和研究不同類型膜結(jié)構(gòu)的生物學(xué)特征，以及進(jìn)行血型鑒定。ABO血型鑒定主要用于臨床輸血，在皮膚、腎等器官移植的時(shí)候選擇ABO血型相符的供體；不孕癥和新

4、生兒溶血癥病因的分析及親子鑒定等。另外，凝集素在臨床疾病防治、機(jī)體生理活動(dòng)調(diào)控以及生物工程等方面展示出了十分廣闊的應(yīng)用前景。如：植物凝集素可抑制受精；蕓豆凝集素可直接抑制HIV1反轉(zhuǎn)錄酶的活性，減少HIV感染者的病毒載量；細(xì)胞膜表面糖復(fù)合物的糖鏈結(jié)構(gòu)與腫瘤細(xì)胞增殖、侵染、轉(zhuǎn)移等發(fā)展過程密切相關(guān)，凝集素芯片技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對癌癥的快速、高通量檢測，有助于篩選出癌癥相關(guān)的糖鏈標(biāo)志物。2.細(xì)胞凝集細(xì)胞凝集細(xì)胞凝集是指細(xì)胞彼此聚集在一起，成為一簇不規(guī)

5、則的細(xì)胞團(tuán)。細(xì)胞膜是雙層脂鑲嵌蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，脂和蛋白質(zhì)又能與糖分子結(jié)合為細(xì)胞表面的分枝狀糖外被。目前認(rèn)為，細(xì)胞間的聯(lián)系，細(xì)胞的生長和分化，免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生都和細(xì)胞表面的分枝狀糖分子有關(guān)。凝集素是一類含糖的（少數(shù)例外）并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集細(xì)胞核刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。3

6、.3.細(xì)胞凝集的反應(yīng)技術(shù)細(xì)胞凝集的反應(yīng)技術(shù)一、直接凝集反應(yīng)技術(shù)顆粒性抗原(細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞等)與相應(yīng)的抗體血清混合后，在電解質(zhì)的參與下，經(jīng)過一定時(shí)間，抗原抗體凝聚成肉眼可見的凝集塊，這種現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)。血清中的抗體稱為凝集素。抗原稱為凝集原。細(xì)菌或其他凝集原都帶有相同的電荷（陰電荷），在懸液中相互排斥而呈均勻的分散狀態(tài)?？乖c抗體相遇后，由于抗原和抗體分子表面存在著相互對應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，因而發(fā)生特異性結(jié)合，稱為抗原抗體復(fù)合物。由于抗

7、體與抗原結(jié)合，降低了抗原分子間的經(jīng)典排斥力，抗原表面的親水基團(tuán)減少，由親水狀態(tài)變?yōu)槭杷疇顟B(tài)，此時(shí)已有凝集的趨向，在電解質(zhì)（如生理鹽水）參與下，由于例子的作用，中山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2013年9月30日科目細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題目細(xì)胞凝集反應(yīng)第3頁共4頁細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告6.先以白紙為襯托，直接觀察雙凹片凹槽內(nèi)混合樣品發(fā)生凝集的現(xiàn)象，注意左右凹槽內(nèi)不同現(xiàn)象的對比，對于發(fā)生凝集的一邊注意觀察凝集與不發(fā)生凝集的區(qū)別。直接觀察后在光學(xué)顯微鏡下觀察兩凹槽內(nèi)

8、現(xiàn)象的區(qū)別，并用照相機(jī)拍攝實(shí)驗(yàn)結(jié)果?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】1.肉眼觀察，對照組中紅細(xì)胞沉積在雙凹片凹槽底部呈大紅點(diǎn)；用凝集素處理的實(shí)驗(yàn)組。顏色越來越淺，透明度逐漸變高，經(jīng)過1分30秒，背景顏色變?yōu)橥该?，紅細(xì)胞呈顆粒狀聚集2.低倍鏡下可以看到對照組中紅細(xì)胞分布較均一，無凝集；實(shí)驗(yàn)組中紅細(xì)胞聚集在一起對照組實(shí)驗(yàn)組【實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與注意事項(xiàng)】分析：1.把液體滴加到雙凹片上時(shí)，注意用量，防止懸液過多而溢出，使兩個(gè)細(xì)胞懸液接觸，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)