Vero細(xì)胞化學(xué)污染物毒性表現(xiàn)特征及在生物毒性檢測(cè)中的可行性分析.pdf

1、近年來飲用水中化學(xué)污染物逐漸增多，對(duì)人體健康和生態(tài)環(huán)境造成的危害日益加重，因此飲用水及相關(guān)材料的安全評(píng)價(jià)具有重要意義。但目前為止，國內(nèi)尚無較為完善的相關(guān)評(píng)價(jià)方法。細(xì)胞毒性試驗(yàn)，尤其是Vero細(xì)胞與人體高度同源，對(duì)各類化學(xué)物質(zhì)的響應(yīng)具有一定的普適性，并且培養(yǎng)方法簡單。 本文研究了有機(jī)物對(duì)Vero細(xì)胞形態(tài)的影響和對(duì)細(xì)胞增殖的抑制，通過比較這兩種細(xì)胞毒性表現(xiàn)特征的靈敏度，分析了Vero細(xì)胞變形法在化學(xué)物質(zhì)生物毒性檢測(cè)中的可靠性，同時(shí)

2、應(yīng)用流式細(xì)胞儀探索了污染物作用下Vero細(xì)胞狀態(tài)的變化及可能原因，最后嘗試用該法來考察飲用水相關(guān)材料的生物安全性。 兩種典型有機(jī)化學(xué)物2,4，6-三氯苯酚(TCP)和鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)作用于Vero細(xì)胞后的形態(tài)觀察結(jié)果表明：和對(duì)照相比，當(dāng)TCP濃度為0.5mg·L<'-1>時(shí)，已有少量細(xì)胞變圓。隨著藥物濃度的增加，變圓細(xì)胞的比例增大；而DOP濃度為0.5ppm時(shí)細(xì)胞輪廓開始加深，透明度下降，隨著濃度進(jìn)一步增加，形態(tài)變化

3、愈發(fā)明顯。用MTT比色法測(cè)定TCP和DOP對(duì)細(xì)胞增殖抑制的結(jié)果表明：TCP濃度大于1mg·L<'-1>，DOP濃度大于1ppm時(shí)，均會(huì)對(duì)Vero細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用；TCP和DOP濃度分別大于5mg·L<'-1>和5ppm時(shí)，藥物濃度和抑制率之間呈良好的正相關(guān)性。而TCP濃度小于1mg·L<'-1>時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖沒有抑制作用，DOP在0.25ppm～2ppm之間抑制率隨濃度呈不規(guī)律變化。 以TCP為例，用流式細(xì)胞術(shù)分析在有機(jī)物

4、作用下Vero細(xì)胞狀態(tài)的變化，結(jié)果表明：(1) TCP對(duì)Veto細(xì)胞的毒性表現(xiàn)特征和TCP濃度有直接關(guān)系。當(dāng)TCP濃度較低(小于1mg·L<'-1>)時(shí)，細(xì)胞毒性主要表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)的變化；當(dāng)TCP濃度大于1mg·L<'-1>時(shí)，細(xì)胞的增殖開始受到抑制；(2) TCP對(duì)Vero細(xì)胞的毒性表現(xiàn)特征和其暴露于TCP的時(shí)間也有重要關(guān)系。TCP作用24h后Vero細(xì)胞的毒性主要表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞膜完整性的影響，產(chǎn)生凋亡的細(xì)胞比例較小。而48h后，Ver

5、o細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，并且隨TCP濃度增加，凋亡和壞死細(xì)胞比例大量增加。細(xì)胞復(fù)壯實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)24h內(nèi)TCP引起Vero細(xì)胞形態(tài)的變化不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞壞死或凋亡，細(xì)胞仍處于存活狀態(tài)。 結(jié)合細(xì)胞形態(tài)變化和流式細(xì)胞儀散點(diǎn)圖，推測(cè)細(xì)胞形態(tài)變化和細(xì)胞膜損傷有關(guān)。由細(xì)胞膜損傷導(dǎo)致的細(xì)胞變形可能是一種較細(xì)胞增殖率、凋亡、壞死等指標(biāo)更為敏感的化學(xué)物細(xì)胞毒性表征方法。最后，利用Vero細(xì)胞形變法對(duì)給水PVC管和一次性塑料杯進(jìn)行細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)，MTT法

6、作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1)給水PVC和一次性塑料杯的材料浸提液會(huì)引起Vero細(xì)胞形態(tài)的變化。當(dāng)浸提液濃度一定時(shí)，隨著浸提溫度的升高，含兩種材料浸提液的培養(yǎng)基中變形細(xì)胞的比例增加，說明溫度升高會(huì)導(dǎo)致材料浸提液中毒性物質(zhì)的增多或濃度增大。(2)當(dāng)溫度一定(37℃)時(shí)，隨著浸提液體積比的增加，變形細(xì)胞的比例明顯增加。細(xì)胞變形和浸提液濃度之間存在較好的相關(guān)性。(3)兩種材料在各溫度下的浸提液對(duì)Vero細(xì)胞增殖有_定的抑制作用，但抑制率和溫度