自身免疫性疾病的免疫學(xué)檢驗(yàn)ppt課件

1、第十五章 自身免疫性疾病的免疫學(xué)檢驗(yàn),1,返回總目錄,目　錄,2,自身耐受(self-tolerance) ：正常情況下，免疫系統(tǒng) 對(duì)宿主自身的組織和細(xì)胞不產(chǎn)生免疫應(yīng)答。 自身免疫 (autoimmunity)：當(dāng)某種原因使自身耐受 性破壞時(shí)，免疫系統(tǒng)就會(huì)對(duì)自身組織成分、細(xì)胞成 分及其產(chǎn)物發(fā)生免疫應(yīng)答。,第一節(jié) 概述,3,自身免疫病(autoimmune disease,AID)：是自身免疫應(yīng)答過強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過久，表現(xiàn)為

2、質(zhì)和量的異常，所產(chǎn)生的自身抗體和（或）自身致敏淋巴細(xì)胞對(duì)表達(dá)自身靶抗原的細(xì)胞和組織發(fā)動(dòng)攻擊，導(dǎo)致?lián)p傷或功能障礙，并出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀。,4,一、自身免疫病與風(fēng)濕性疾病,風(fēng)濕性疾病（rheumatic diseases）泛指影響骨、關(guān) 節(jié)及周圍軟組織等一組疾病，簡稱風(fēng)濕病。,5,結(jié)締組織病(connective tissue disease,CTD) 是指病變主要發(fā)生于結(jié)締組織，有組織黏液樣水腫、纖維蛋白樣變性及壞死性血管炎等基本病

3、理變化的一組疾病。以往所指的結(jié)締組織病或膠原病是風(fēng)濕性疾病的一部分，它們和風(fēng)濕性疾病不可完全等同。,6,1.發(fā)生與感染、遺傳、性激素等因素有關(guān)，屬AID；2.結(jié)締組織及血管的慢性炎癥為其基本病理變化；3.病變可累及多系統(tǒng)、多器官；發(fā)病情況差異大，為異質(zhì)性疾?。?.以關(guān)節(jié)、肌肉、軟組織等疼痛為主要癥狀；6.血清中可查出多種自身抗體；7.對(duì)糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑藥物治療有療效；8.病程慢性、反復(fù)、進(jìn)行性，最終可導(dǎo)致殘疾或死亡

4、。,風(fēng)濕病的臨床特點(diǎn),7,二、自身免疫病的共同特征,8,三、自身免疫病的分類,按自身抗原分類,,,,,器官特異性自身免疫性疾病,器官非特異性自身免疫性疾病,患者的病變常局限于某一特定的器官，由對(duì)器官的特異性抗原的免疫應(yīng)答引起,全身性或系統(tǒng)性自身免疫性疾??；患者的病變可見于多種器官及結(jié)締組織（結(jié)締組織病或膠原病）,9,10,11,12,按發(fā)病部位的解剖系統(tǒng)分類,13,14,（一）自身抗原形成,分子模擬,四、自身免疫病的發(fā)病機(jī)制,隱蔽

5、抗原的釋放,自身抗原改變,15,多克隆激活,（二）免疫系統(tǒng)發(fā)育和免疫調(diào)節(jié)異常,胸腺 骨髓 功能異常,Th1和Th2細(xì)胞功能失衡,16,,（三）遺傳因素,17,1.自身抗體的作用,（四）AID的病理損傷機(jī)制,抗血細(xì)胞表面抗原的抗體,18,1.自身抗體的作用——抗細(xì)胞表面受體抗體,重癥肌無力,19,抗細(xì)胞表面受體抗體,毒性彌漫性甲狀腺腫（Graves?。┌l(fā)病機(jī)制示意圖,20,自身抗體——抗核抗體,腎小球、關(guān)節(jié)、皮膚

6、和其它多種器官的毛細(xì)血管壁,,結(jié)合,,循環(huán)中的核抗原,多部位脈管炎 系統(tǒng)性紅斑狼瘡,,形成,可溶性抗原—抗體IC,,反復(fù)沉積,1. 自身抗體的作用： 自身抗體與相應(yīng)抗原形成的免疫復(fù)合物,21,2. 自身應(yīng)答性T淋巴細(xì)胞作用 針對(duì)自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答的T細(xì)胞可引起組織 損傷，這類疾病屬于Ⅳ型超敏反應(yīng)引起的疾病。 3. 巨嗜細(xì)胞和NK細(xì)胞的作用 巨噬細(xì)胞在AID的組織損傷中也起重要作用。巨噬細(xì)胞被細(xì)胞因子激活后，

7、就具有細(xì)胞毒作用。,（四）AID的病理損傷機(jī)制,返回章目錄,22,抗核抗體（antinuclear antibody，ANA): 是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱； 在某些因素作用下改變細(xì)胞核某些成分性質(zhì)，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生許多抗不同核成分的抗體；,第二節(jié) 自身免疫性疾病的免疫學(xué)檢查,一、抗核抗體測(cè)定,23,ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA無器官特異性和種屬特異性；ANA主要存在于血清中；

8、將檢出ANA作為AID存在的依據(jù)。,24,抗DNA抗體：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗組蛋白抗體(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、 抗H3、抗H4抗體等 抗非組蛋白抗體：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、 抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗體、 AnuA、抗DNP、抗D’E多肽抗體、抗DM53抗體

9、 抗RANA抗體、抗著絲點(diǎn)、抗Ku抗體等 抗核仁抗體：抗PM-Scl抗體、抗Th/To抗體、 抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗體等,（一）ANA的類型和臨床意義,,,ANA譜,25,①抗天然DNA (native DNA,nDNA) 抗體，又稱抗雙鏈DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗體。,②抗變性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗體，又稱抗

10、單鏈DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗體。,對(duì)SLE有高特異性;SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。,,,,,緩解期降低,70%～90%SLE活動(dòng)期增高,藥物療效,,抗dsDNA抗體,抗DNA抗體,26,抗組蛋白抗體（anti-histonic antibody,AHA）： 由H1、H2A、H2B、H3和H4五個(gè)亞單位，各自都 有特異性抗體；,,,,,AHA,檢出百分率,抗dsDNA,,,,

11、50,70,90,100,,藥物誘導(dǎo)性狼瘡只能檢出此,SLE,AHA,AHA,抗組蛋白抗體,27,可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen,ENA) 是鹽水可提取性核抗原的總稱，是非組蛋白的核蛋 白，屬酸性核蛋白抗原，由許多小分子量的RNA和多 肽組成。,抗ENA抗體,28,對(duì)風(fēng)濕病有特異診斷價(jià)值的有以下七種： ①抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗體； ②抗Sm抗體；

12、 ③抗SSA抗體； ④抗SSB抗體； ⑤抗Scl-70抗體； ⑥抗Jo-1抗體； ⑦抗核糖體抗體 。,29,抗DNP抗體（抗核蛋白抗體）：核蛋白(DNP)抗原由DNA和蛋白質(zhì)組成。DNP抗原有不溶性和可溶性兩種，可分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。,,,,,檢出百分率,抗DNP,,,,20,40,60,80,,SLE非活動(dòng)期,SLE活動(dòng)期,抗不溶性DNP抗體,抗DNP,

13、抗DNP,,100,RA滑膜液中,抗DNP,抗可溶性DNP抗體,抗DNP抗體,30,抗核小體抗體（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是細(xì)胞核染色質(zhì)的基本單位; 細(xì)胞凋亡而致核小體大量蓄積， 誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生的AnuA是SLE 特異性的標(biāo)志抗體。,,,,抗dsDNA抗體,,,抗核小體抗體,抗dsDNA和抗Sm陰性的SLE陽性率為60%～80%，特異性＞97%。,抗核小體抗體,31,32,（

14、二）ANA的檢測(cè)方法,將患者血清先進(jìn)行稀釋，可以做定量試驗(yàn)，在1:80稀釋仍呈陽性時(shí)，對(duì)SLE的診斷有較大的參考價(jià)值。,形成胞核基質(zhì)—ANA—抗人Ig · FITC,1.熒光免疫法,33,34,均質(zhì)型,抗核抗體核型,著絲點(diǎn)型,核仁型,斑點(diǎn)型,35,例：間接免疫熒光法（IIF法） 測(cè)定抗dsDNA抗體,短膜蟲的動(dòng)基體內(nèi)含有大量純的 dsDNA，無其他抗原干擾，可用 作基質(zhì)來測(cè)定抗dsDNA抗體。 短膜

15、蟲替換小鼠肝切片或肝印片或 Hep2，制成抗原基質(zhì)—抗dsDNA—抗人IgG · FITC, 陽性結(jié)果可見鞭毛一端的動(dòng)基體顯示清晰的熒光。 測(cè)定抗dsDNA抗體具有特異性強(qiáng)、敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。,36,用ELISA間接法檢測(cè)抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體和抗核小體抗體。,2. ELISA法,37,,,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳,待檢血清,,按分子大小分開不同區(qū)帶,,分離,轉(zhuǎn)印,NC膜上,,,抗ENA與膜上相應(yīng)抗原帶結(jié)合

16、,,抗人IgG·HRP,,NC—ENA—抗ENA—抗人IgG·HRP—顯色,3. IBT法,38,類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor,RF): 是抗變性IgG的 自身抗體，為19S的IgM，也可見7S的IgG和IgA。 與人變性IgG結(jié)合，不與正常IgG發(fā)生凝集反應(yīng)。 RF出現(xiàn)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者中，約70%～ 90%的血清中和約60%的滑膜液中可檢出IgG類RF；,二、

17、類風(fēng)濕因子測(cè)定,39,IgG類抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，即發(fā)生變性； 在炎癥過程中也可發(fā)生IgG變性，構(gòu)成自身抗 原，刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生各種抗IgG抗體； 滑膜液中的IgG類RF與變性IgG結(jié)合形成中等 大小的IC，比血清中IgM類RF更易致病。,40,（一）RF檢測(cè)方法,RF檢測(cè)最常采用的試驗(yàn)方法。 將IgG吸附在聚苯乙烯膠乳顆粒上作為診斷試劑，與待檢血清中的RF結(jié)合，出現(xiàn)膠乳凝集顆粒。但此法的靈敏度和特異性均不高

18、，而且只能檢出血清中的IgM類RF。,間接膠乳凝集試驗(yàn),41,將待檢血清稀釋成一定濃度，再加入定量變性IgG診斷試劑，立即用透射比濁或速率散射比濁儀測(cè)定血清中的RF。此法具有速度快、敏感性高（達(dá)ng/L水平）、精密度高（CV<5%）、穩(wěn)定性好、能定量分析的優(yōu)點(diǎn)，但仍局限在IgM類RF的檢測(cè)。,免疫比濁法,42,IgM、IgG和IgA類RF需要用RIA法或ELISA法等方法檢測(cè)，但前者有放射性污染，故臨床上多采用ELISA間接法或雙

19、抗原夾心法進(jìn)行測(cè)定。,ELISA法,43,（二）臨床應(yīng)用,RF在診斷RA患者時(shí)并非特異的，也非唯一標(biāo)準(zhǔn)。慢性活動(dòng)性肝炎及老年人均可有不同程度的陽性率。,44,三、其他自身抗體測(cè)定,返回章目錄,45,1.篩選試驗(yàn)與確診性試驗(yàn)的合理組合；2.結(jié)合臨床癥狀選擇性檢測(cè)相關(guān)的自身抗體；3.切忌盲目的全面檢測(cè)自身抗體。4.通常以抗核抗體作為篩選試驗(yàn)，ANA在許多AID中 可呈陽性。5.ANA陽性時(shí)，再進(jìn)行針對(duì)特異性靶抗原成分的自身

20、 抗體的檢測(cè)，達(dá)到明確診斷的目的。,第三節(jié) 自身抗體的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)選擇的原則,一、自身抗體檢測(cè)的一般原則,46,,,二、實(shí)驗(yàn)室方法的選擇及結(jié)果的確認(rèn),IIF法,篩選試驗(yàn),ANA,抗dsDNA,IB法ELISA法IFA法,特異性實(shí)驗(yàn),,,抗原基質(zhì)片(Hep-2細(xì)胞、小鼠肝印片/切片)，加入自身抗體后與抗原成分相結(jié)合，再與熒光標(biāo)記的抗抗體結(jié)合，根據(jù)熒光在細(xì)胞上的著色部位進(jìn)行定位分析。,特異性純化抗原包被載體，檢測(cè)特異性自身抗體；特異性抗原

21、不易純化或不明確，用ELISA法和IBT法等檢測(cè)自身抗體會(huì)有一定誤差。,返回章目錄,47,小 結(jié),自身免疫病是由于某種原因使自身免疫應(yīng)答過強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過久，表現(xiàn)為質(zhì)和量的異常，所產(chǎn)生的自身抗體和（或）自身致敏淋巴細(xì)胞對(duì)表達(dá)自身靶抗原的細(xì)胞和組織發(fā)動(dòng)攻擊，導(dǎo)致?lián)p傷或功能障礙，并出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀。,48,風(fēng)濕病泛指影響骨、關(guān)節(jié)及周圍軟組織等一組疾病。結(jié)締組織病是指病變主要發(fā)生于結(jié)締組織，具有組織黏液樣水腫、纖維蛋白樣變性及壞死性血管炎等基