酵母rna的提取實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、酵母酵母RNA的提取紫外吸收法測(cè)的提取紫外吸收法測(cè)RNA濃度實(shí)驗(yàn)報(bào)告濃度實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握稀堿法提取酵母RNA的原理和方法。2、掌握紫外線（UV）吸收法測(cè)定核酸濃度的原理。3、熟悉紫外分光光度計(jì)的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理核酸是生命的最基本物質(zhì)之一，廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)。對(duì)核酸的研究是更深入研究生命體的基本前提之一。研究核酸需要純度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物學(xué)研究中相當(dāng)重要。本

2、次實(shí)驗(yàn)提取酵母的核糖核酸（RNA）。RNA離體后穩(wěn)定性很差，含量低，所以在提取的時(shí)候就要注意防止核酸的降解和變性，防止過酸、過堿、避免劇烈攪拌，尤其重要的是防止RNA酶的作用。本實(shí)驗(yàn)是醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域與大工業(yè)生產(chǎn)的基礎(chǔ)方法。核酸（RNA）都是由核苷酸組成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、堿基和磷酸以等分子比例構(gòu)成的，故測(cè)定組成核苷酸的任意一種組分即可以測(cè)定生物體內(nèi)核酸的含量或者是提取出來的核酸的含量。提取RNA的方法很多，在工業(yè)生產(chǎn)上常用

3、的是稀堿法和濃鹽法。前者是利用堿使細(xì)菌細(xì)胞壁溶解，是RNA釋放出來，后者是在加熱的條件下，利用高濃度的鹽改變細(xì)胞膜的通透性，使RNA釋放出來。使用濃鹽法提取RNA的時(shí)候應(yīng)該注意掌握溫度，直接至90~100℃浸提，避免在20~70℃的時(shí)間過長(zhǎng)，因?yàn)檫@是磷酸二酯酶和磷酸單酯酶的作用活躍的溫度范圍，會(huì)使RNA降解而降低提取率。這兩種方法是從廢棄的啤酒酵母中提取RNA的一般方法。但是這兩種方法各有利弊，如濃鹽法提取的RNA純度高，而稀堿法提取的

4、時(shí)間短，提取率高，更利于工業(yè)化生產(chǎn)。RNA在260nm處有最大吸收峰，一定濃度范圍內(nèi)其濃度與吸光度成正比，故可以用紫外分光光度計(jì)通過比色來測(cè)定RNA含量。由于蛋白質(zhì)在280nm波長(zhǎng)處也有光吸收，對(duì)RNA測(cè)定有一定的干擾作用，但蛋白質(zhì)的最大吸收峰在280nm處，如同時(shí)測(cè)定280nm的光吸收，通過計(jì)算可消除其對(duì)RNA測(cè)定的影響。因此如其中含有蛋白質(zhì)時(shí)必須同時(shí)測(cè)定280nm和260nm的吸光度，可通過計(jì)算測(cè)定溶液中RNA的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材三

5、、實(shí)驗(yàn)器材表2.根據(jù)表1.表2.繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線紫外線測(cè)RNA濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線05101520253035404500.10.20.30.40.50.60.70.80.91260nm吸光度Linear(260nm吸光度)260nm吸光度吸光度樣品平均吸光度為0.707通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可得到稀釋后樣品濃度為30.739μgml所得樣品RNA百分含量ω==62.48%七、分析與討論七、分析與討論1、在使用離心機(jī)時(shí)，離心管要對(duì)稱放置，而且對(duì)稱的離心管重