實(shí)驗(yàn)十一--血清alt測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)十一十一血清血清ALT測(cè)定（定（賴氏法）氏法）【目的目的】1.了解血清ALT活性測(cè)定的原理及測(cè)定方法。2.掌握血清ALT活性測(cè)定的臨床意義?！驹碓怼勘彼崤cα酮戊二酸在丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的作用下生成丙酮酸和谷氨酸。在反應(yīng)到達(dá)規(guī)定時(shí)間時(shí)，加入2，4二硝基苯肼鹽酸溶液以終止反應(yīng)。生成的丙酮酸與2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙。后者在堿性條件下顯棕紅色。根據(jù)顏色的深淺，求得血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活力。反應(yīng)

2、式如下：COOHCHCH3NH2COOHCOCH2CH2COOH￡ALTCH3CCOOHOCOOHCHNH2CH2CH2COOH￡COOHCCH3O￡CH3CCOOHNNO2NO2NHNO2NO2NHNH22￡42￡4￡￡?NaOHH2O【器材器材】試管、刻度吸管、恒溫水浴箱、分光光度計(jì)?！驹噭┰噭?.0.1molL磷酸鹽緩沖液（pH7.4）稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4，AR)11.928g，磷酸二氫鉀(KH2PO4，AR)2.17

3、6g，加少量蒸餾水溶解并稀釋至1000ml。2.ALT底物液稱取α酮戊二酸29.2mg，DL丙氨酸1.79g于燒瓶中，加0.1molLpH7.4磷酸鹽緩沖液80ml煮沸溶解后冷卻，用1molLNaOH調(diào)節(jié)pH至7.4（約加入0.5ml），再用0.1molL磷酸鹽緩沖液在容量瓶?jī)?nèi)加至100ml，混勻，加氯仿數(shù)滴，置冰箱可保存數(shù)周。3.丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（2μmolml）精確稱取丙酮酸鈉(AR)22.0mg于100ml容量瓶中，加0.1molLp

4、H7.4磷酸鹽緩沖液至刻度。賴氏法的酶活力單位是根據(jù)本法中丙酮酸量及其吸光度值與卡門氏單位的對(duì)等關(guān)系，套用卡門氏單位而來。卡門氏單位的定義是：血清1ml，反應(yīng)液總量3ml，反應(yīng)溫度25℃，波長(zhǎng)340nm，比色杯光徑1cm，每分鐘吸光度減少0.001為一個(gè)卡門氏單位?！九R床意義】【臨床意義】ALT主要存在各組織細(xì)胞中，以肝細(xì)胞中含量最多，正常情況下只有極少量釋放入血，血清中ALT活性很低。當(dāng)肝細(xì)胞病變、壞死或肝細(xì)胞膜通透性增加時(shí)，ALT可