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文檔簡介
1、1親和層析法純化胰蛋白酶親和層析法純化胰蛋白酶實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一雞卵蛋白的提取雞卵蛋白的提取50毫克雞卵清于250毫升燒杯中攪拌且緩加等體積10%TCA溶液穩(wěn)定PH在3.50.2，放入4C冰箱過夜沉淀轉(zhuǎn)移到50毫升離心杯中，3000rpm離心15min轉(zhuǎn)移雞卵蛋白與50毫升離心杯中，3000rpm離心15min收集上清液收集上清液，濾紙過濾棄去上清液棄去沉淀沉淀離心杯與真空干燥器中，抽去殘留丙酮。（沉淀變?yōu)橥该髂z狀物）濾液用1molL鹽酸在P
2、H計(jì)下調(diào)PH至3.5加入25毫升蒸餾水或20mmolL，PH6.5磷酸緩沖液溶解。濾紙過濾吸出上清液棄去上浮脂類物質(zhì)和不溶物加三倍體積預(yù)冷丙酮，攪拌，塑料膜封口，冰箱4攝氏度靜止4h濾液收集備用棄去沉淀將雞卵蛋白濾液先經(jīng)SephadexG25分離純化，再由DEAECellulose離子交換層析柱分離收集雞卵蛋白分離液轉(zhuǎn)入透析袋，以蒸餾水透析，常換水，直到滲出液頸硝酸銀檢驗(yàn)無氯離子透析的雞卵蛋白液以0.1molL鹽酸調(diào)PH4.0，量體積加
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