竹伐樁促腐微生物的篩選及培養(yǎng)條件的研究.pdf

1、近來竹資源的大力開發(fā)造成林地留下大量伐樁、同時(shí)竹木質(zhì)纖維素原料利用率不高造成資源浪費(fèi)、以及環(huán)境污染問題，高效竹木質(zhì)纖維素降解菌的篩選及其降解能力的研究必將是竹伐樁促腐工作、竹木質(zhì)纖維素原料高效利用的關(guān)鍵。本論文主要分為以下幾個(gè)部分：
　　 1.竹伐樁促腐微生物的分離篩選
　　 采用直接稀釋法和富集分離法對(duì)竹腐伐樁的樣品中的微生物進(jìn)行分離純化，利用纖維素底物或木質(zhì)素底物類似物的平板法對(duì)菌株進(jìn)行初篩，采用菌株纖維素酶活、水溶

2、性木質(zhì)素降解率和漆酶酶活測(cè)定的方法進(jìn)行復(fù)篩。共分離篩選15株微生物菌株，包括真菌菌株F2、F3、F4、F9、F10、F13、F14，放線菌菌株A1～A3和細(xì)菌菌株B1～B5。
　　 2.菌株降解性能研究及菌種鑒定
　　 采用固態(tài)竹屑培養(yǎng)基，測(cè)定了復(fù)篩菌株培養(yǎng)15 d時(shí)對(duì)竹纖維素和竹木質(zhì)素的降解率，其中真菌菌株F2和F10對(duì)竹纖維的降解率分別為23.96％和24.31％，均高于參照菌株綠色木霉YJ-3的19.59％；對(duì)竹木

3、質(zhì)素的降解率分別為16.92％和19.15％，均高于參照菌株黃孢原毛平革菌ME-446的16.53％。生長(zhǎng)情況較好的細(xì)菌菌株均有一定降解能力。
　　 為挑選有效菌株，對(duì)4株產(chǎn)芽孢細(xì)菌進(jìn)行了16S rDNA序列測(cè)定和部分生理生化實(shí)驗(yàn)，根據(jù)結(jié)果初步鑒定B2～B5分別為Bacillus. sp、B. simplex、B.sphaericus、B.subtilis。對(duì)真菌菌株F2和F10進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察，初步將F2鑒定為Trichode

4、rma.sp，將F10鑒定為Fusarium oxysporum。結(jié)合F2的rDNA ITS序列分析將F2初步鑒定為Trichoderma harzianum。除F.oxysporum為常見植物病原菌外。其余菌株均為對(duì)植物生長(zhǎng)有益或有抗植病能力的微生物。
　　 為獲得有效的混合菌種，首先對(duì)菌株B2～B5進(jìn)行了拮抗實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)B5對(duì)B2～B4均有拮抗作用，B2對(duì)B3有拮抗作用。據(jù)此設(shè)計(jì)了F2+B2、F2+B4、F2+B5、F2+B3

5、+B4和F2+B2+B4五種菌種組合，測(cè)定了混合菌株培養(yǎng)15 d時(shí)對(duì)竹纖維素和竹木質(zhì)素的降解率，組合F2+B4和F2+B2+B4對(duì)竹纖維素降解率分別為26.64％，28.85％，對(duì)竹木質(zhì)素降解率分別為21.13％，20.64％，均比F2單獨(dú)培養(yǎng)效果好。
　　 3.木霉F2產(chǎn)孢條件研究
　　 木霉制劑一般以孢子形式應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)木霉F2在固態(tài)竹屑培養(yǎng)基中的最高孢子生物量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PDA液態(tài)培養(yǎng)基。利用瓊脂平板法進(jìn)行的碳氮源選