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1、 1 基因工程 基因工程 [最新考綱] 1.基因工程的誕生(Ⅰ) 2.基因工程的原理及技術(shù)(Ⅱ) 3.基因工程的應(yīng)用(Ⅱ) 4.蛋白質(zhì)工程(Ⅰ) [對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)P198] 考點(diǎn)一 基因工程的操作工具 1.基因工程的概念理解 (1)供體:提供目的基因。(2)操作環(huán)境:體外。(3)操作水平:分子水平。(4)原理:基因重組。 (5)受體:表達(dá)目的基因。 (6)本質(zhì):目的基因在受體體內(nèi)表達(dá)。 (7)優(yōu)點(diǎn) ①與雜交育種相比:克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和
2、的障礙。 ②與誘變育種相比:定向改造生物遺傳性狀。 2.DNA 重組技術(shù)的基本工具 (1)限制性核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱(chēng):限制酶) ①來(lái)源:主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。 ②作用:識(shí)別特定的核苷酸序列并切開(kāi)相應(yīng)兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。 ③結(jié)果:產(chǎn)生黏性末端或平末端。 (2)DNA 連接酶 ①種類(lèi):按來(lái)源可分為 E·coli DNA 連接酶和 T4DNA 連接酶。 ②作用:在兩個(gè)核苷酸之間形成磷酸二酯鍵以連接兩段 DNA 片段。
3、 (3)載體 ①種類(lèi):質(zhì)粒、λ 噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。 ②質(zhì)粒特點(diǎn)? ? ? ? ?能自我復(fù)制有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)有特殊的標(biāo)記基因[深度思考] (1)限制酶與 DNA 連接酶的關(guān)系。 提示:①限制酶和 DNA 連接酶的作用部位都是磷酸二酯鍵。 3 A.用 EcoRⅠ切割目的基因和 P1噬菌體載體 B.用 BglⅡ和 EcoRⅠ切割目的基因和 P1噬菌體載體 C.用 BglⅡ和 Sau3AⅠ切割目的基因和 P1噬菌體載體 D
4、.用 EcoRⅠ和 Sau3AⅠ切割目的基因和 P1噬菌體載體 解析:選 D。解答本題的關(guān)鍵是要看清切割后目的基因插入的方向,只有用 EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和 P1噬菌體載體,構(gòu)建的重組 DNA 中 RNA 聚合酶在插入的目的基因上的移動(dòng)方向才一定與圖丙相同。 2.下列關(guān)于載體的敘述中,錯(cuò)誤的是( ) A.載體與目的基因結(jié)合后,實(shí)質(zhì)上就是一個(gè)重組 DNA 分子 B.對(duì)某種限制酶而言,載體最好只有一個(gè)切點(diǎn),但還要有其他多種
5、酶的切點(diǎn) C.目前常用的載體有質(zhì)粒、λ 噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒 D.載體具有某些標(biāo)記基因,便于對(duì)其進(jìn)行切割 解析:選 D。標(biāo)記基因的作用是便于篩選出重組載體,不是便于對(duì)其切割。 3.如圖為 DNA 分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化,圖中依次表示限制酶、DNA 聚合酶、DNA 連接酶、解旋酶作用的正確順序是( ) A.①②③④ B.①②④③ C.①④②③ D.①④③② 解析:選 C。限制酶可在特定位點(diǎn)對(duì) DNA 分子進(jìn)行切割;
6、DNA 聚合酶在 DNA 分子復(fù)制時(shí)將脫氧核苷酸連接成脫氧核苷酸鏈;DNA 連接酶可將限制酶切開(kāi)的磷酸二酯鍵連接在一起;解旋酶的作用是將 DNA 雙鏈解開(kāi)螺旋,為復(fù)制或轉(zhuǎn)錄提供模板。 1.限制酶是一類(lèi)酶,而不是一種酶。 2.限制酶切割位點(diǎn)所處的位置必須是在所需的標(biāo)記基因之外, 這樣才能保證標(biāo)記基因的完整性,有利于對(duì)目的基因的檢測(cè)。 3.為使目的基因與載體形成相同的 DNA 片段末端連接, 通常使用同一種限制酶將二者切割, 但如果不同的限
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