久效鱗農(nóng)藥對(duì)金魚(yú)(Carassius auratus)生殖軸線的影響研究.pdf

1、久效磷是一種高毒的有機(jī)磷農(nóng)藥,可以誘導(dǎo)雄性金魚(yú)卵黃原蛋白(Vitellogenin,VTG)mRNA的表達(dá)和蛋白合成與分泌,具有潛在的環(huán)境雌激素活性,可能是通過(guò)干擾金魚(yú)下丘腦-垂體-性腺軸(簡(jiǎn)稱(chēng)生殖軸線)對(duì)性激素分泌、調(diào)控完成的。本文檢測(cè)了久效磷農(nóng)藥對(duì)雄性金魚(yú)性激素水平的影響,并從芳香化酶(P450 aromatase,P450arom)表達(dá)、促性腺激素(gonadotropins,GtHs)合成與分泌、促性腺激素釋放激素(gonado

2、tropin-releasing hormones,GnRHs)調(diào)控等多個(gè)層次探討了久效磷農(nóng)藥影響內(nèi)源性激素水平的原因,以期從生殖軸線的角度闡明與雌激素受體無(wú)親和性的久效磷農(nóng)藥發(fā)揮環(huán)境雌激素活性的機(jī)制。此外,雌性魚(yú)類(lèi)生殖活動(dòng)同樣受到生殖軸線的調(diào)節(jié),其調(diào)控機(jī)制與雄性魚(yú)類(lèi)類(lèi)似,為了確定久效磷農(nóng)藥對(duì)雌性魚(yú)類(lèi)生殖系統(tǒng)和生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的干擾作用,本文同時(shí)研究了久效磷農(nóng)藥對(duì)雌性金魚(yú)生殖軸線的影響。
　　 本文研究結(jié)果表明:
　　 (

3、1)0.01、0.10和1.00 mg/L久效磷農(nóng)藥暴露金魚(yú)21天后,采用放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)檢測(cè)了血漿中性激素含量。結(jié)果表明:在雄魚(yú)體內(nèi),睪酮(testosterone,T)基樣含量較高,17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)含量極低;在雌魚(yú)體內(nèi),E2基樣含量較高,T含量較低;隨著久效磷暴露濃度的升高金魚(yú)血漿中T含量逐漸降低,E2含量逐漸升高,即E2/T比例逐漸升高,表明久效磷農(nóng)藥暴露

4、影響了金魚(yú)血漿性激素的水平,從而誘導(dǎo)雄性金魚(yú)合成VTG,雌性金魚(yú)卵巢增重。
　　 (2)0.01、0.10和1.00 mg/L久效磷農(nóng)藥暴露金魚(yú)21天后,采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)了性腺和下丘腦組織中P450arom mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明:隨著久效磷農(nóng)藥暴露濃度的升高金魚(yú)性腺P450aromA mRNA表達(dá)量逐漸升高,而下丘腦P450aromB表達(dá)無(wú)顯著變化。因此,我們認(rèn)為久效磷農(nóng)藥作用的特異性靶位點(diǎn)為性腺P450a

5、romA,而非腦P450aromB,且其可能是通過(guò)提高金魚(yú)性腺P450aromA的表達(dá),促進(jìn)了T向E2的轉(zhuǎn)化,從而導(dǎo)致E2水平和E2/T比值的顯著升高。
　　 (3)0.01、0.10和1.00 mg/L久效磷農(nóng)藥暴露金魚(yú)21天后,采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)了垂體組織中兩種GtHsβ亞基mRNA表達(dá)水平,包括卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和促黃體激素(luteinizing

6、hormone,LH,),采用RIA檢測(cè)了血漿中LH、FSH的含量。結(jié)果表明:隨著久效磷農(nóng)藥暴露濃度的升高金魚(yú)FSHβ亞基mRNA表達(dá)和血漿水平逐漸升高,LHβ亞基mRNA表達(dá)和血漿水平逐漸降低。而FSH水平的升高會(huì)導(dǎo)致E2水平的升高,LH水平的降低會(huì)導(dǎo)致T水平的降低,從而進(jìn)一步加強(qiáng)P450aromA基因表達(dá)升高所造成的雄雌激素比例的失衡。因此,我們認(rèn)為生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)也是久效磷作用于金魚(yú)生殖軸線的潛在靶位點(diǎn),從而間接影響性激素合成與分泌

7、。
　　 (4)0.01、0.10和1.00 mg/t,久效磷農(nóng)藥暴露金魚(yú)21天后,采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)了下丘腦促性腺激素釋放素sGnRH、cGnRH-Ⅱ mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明:隨著久效磷農(nóng)藥暴露濃度的升高金魚(yú)下丘腦sGnRH、cGnRH-ⅡmRNA表達(dá)水平均無(wú)顯著變化。久效磷農(nóng)藥對(duì)金魚(yú)神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的潛在影響尚需進(jìn)一步研究。
　　 綜上所述,本文從性腺性激素合成與轉(zhuǎn)化、垂體GtHs合成與分泌、下丘腦G

8、nRHs調(diào)控三個(gè)層次,研究了久效磷農(nóng)藥對(duì)雄性、雌性金魚(yú)下丘腦-垂體-性腺軸的干擾作用。本文首次提出了久效磷農(nóng)藥環(huán)境雌激素作用機(jī)制,證實(shí)了久效磷與E2等化合物不同,不是與雌激素受體直接結(jié)合發(fā)揮其雌激素效應(yīng),而是通過(guò)生殖軸線的其他位點(diǎn)。久效磷誘導(dǎo)雄性金魚(yú)合成VTG主要通過(guò):(1)使雄性金魚(yú)性腺芳香化酶的基因表達(dá)顯著增強(qiáng),從而提高血漿中E2含量;(2)影響垂體GtHs表達(dá)與分泌,從而干擾生殖內(nèi)分泌調(diào)節(jié),間接影響性激素水平。同時(shí),本文研究證實(shí)了