莠去津降解細菌HB-5的鑒定、發(fā)酵及其降解酶初步純化的研究.pdf

1、HB-5是本實驗室從農(nóng)藥廠廢水中分離得到的一株莠去津降解細菌，前期研究結(jié)果表明，根據(jù)降解菌HB-5的菌體、菌落形態(tài)以及生理生化特性測定，初步鑒定其為革蘭氏陽性的節(jié)桿菌屬；當溫度為35℃，pH為8.5時，降解酶對莠去津的降解率最高。本文以莠去津降解細菌HB-5作為主要的研究對象，利用現(xiàn)代分子生物學的手段對其進行了鑒定；對HB-5產(chǎn)降解酶的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化，并對其產(chǎn)生的降解酶的分離純化進行了初步探討。 主要內(nèi)容如

2、下： 1．介紹了莠去津的理化性質(zhì)、國內(nèi)外應(yīng)用概況，以及由于其廣泛應(yīng)用所帶來的環(huán)境污染問題；在對前人工作總結(jié)分析的基礎(chǔ)上，對莠去津在環(huán)境介質(zhì)中的殘留動態(tài)、降解代謝以及生物修復技術(shù)進行了綜述；并對16SrRNA基因序列的同源性分析用于細菌系統(tǒng)分類鑒定，莠去津降解細菌的搖瓶發(fā)酵研究以及酶的分離純化等方面進行了簡要概括。進而提出了作者要研究的問題。 2．通過對菌株HB-5的16S rDNA序列的同源性分析，菌株HB-5與Ar

3、throbactet·sp．AD3同源性達99.3％，進一步將其鑒定為節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)。 3．以從降解細菌HB-5中提取到的降解酶對莠去津的降解率為指標，進行最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基及發(fā)酵條件的研究，以提高其產(chǎn)酶量。通過單次單因子試驗、正交試驗和均勻試驗，對細菌HB-5的發(fā)酵培養(yǎng)基與發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。結(jié)果表明，最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：蔗糖3.0g'L<'-1>，莠去津0.38g.L<'-1>，K<,2>HPO<,4>

4、0.5g.L<'-1>，KH<,2>PO<,4> 1.2g.L<'-1>，MgSO<,4>.7H<,2>O 1.2g'L<'-1>，NaCl 0.1 g.L<'-1>，微量元素溶液3.8mL·L<'-1>。 最佳發(fā)酵條件為：培養(yǎng)時間48h，接種量2％，發(fā)酵液初始pH 9，250mL，的三角瓶裝液量為80mL。 運用最佳發(fā)酵培養(yǎng)基在最優(yōu)條件下發(fā)酵，降解酶對莠去津的降解率(91.64％)比原培養(yǎng)基(40.67％)提高了1