三國吳簡腐蝕斑微生物的分離鑒定及其木質素降解性能研究.pdf

1、湖南長沙簡牘博物館收藏了一批走馬樓出土的三國時期吳國竹簡，具有極為珍貴的史料價值。在出土后保存過程中，該批竹簡暴發(fā)了竹簡蝕斑病，竹簡竹體被微生物侵蝕，其中的木質素、纖維素被某種或者某群微生物所降解，蝕斑中的竹簡竹體變?yōu)榘胪该髂钗镔|，并且容易破裂脫落。 本研究以該批爆發(fā)蝕斑病的竹簡浸泡液為原料，采用適于各種微生物生長的不同的豐富培養(yǎng)基分離純化其中的可培養(yǎng)微生物，共分離得到9株可培養(yǎng)菌株的純培養(yǎng)，其中8株細菌，1株霉菌。結合培養(yǎng)

2、特征、形態(tài)特征和基于細菌16S rDNA和真菌18S rDNA、ITS基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析，將8株細菌分別劃歸為4個綱（α-Proteobacteria、β-Proteobacteria、γ-Proteobacteria、Bacilli）的7個屬（Bacillus、Acinetobacter、Staphylococcus、Pandoraea、Novosphingobium、Cupriavidus以及Comamonas）；霉菌屬于Asp

3、ergillus。 利用木質素磺酸鈉為唯一碳源的固體平板培養(yǎng)基，從三國吳簡腐蝕竹簡浸泡液分離到的9株菌種中初步篩選出7株具有木質素降解潛力的菌株，其中6株細菌分別為Acinetobacter sp. B-2、Bacillus sp. B-3、Pandoraea sp. B-6、 Novosphingobium sp. B-7、Cupriavidus sp. B-8、Comamonas sp. B-9以及一株霉菌Aspergil

4、lus sp. F-1。采用染料苯胺藍和RB亮藍平板定性檢測菌株產(chǎn)木質素降解酶，初篩得到的7株具有木質素降解潛力的菌株均能產(chǎn)木質素降解酶。 以木質素磺酸鈉為唯一碳源的培養(yǎng)基對菌株進行液體降解培養(yǎng)實驗，采用紫外分光光度法，在280nm處測定培養(yǎng)濾出液的吸光度，初步研究了篩選到的7株菌的木質素降解性能。結果表明，6株細菌的木質素降解率在14h內均可以達到20％左右，霉菌培養(yǎng)72h也達到了33.3％，7株菌種均具有高效的木質素降解能

5、力。 對細菌Acinetobacter sp. B-2、Pandoraea sp. B-6、Novosphingobium sp. B-7進行了培養(yǎng)條件的調控實驗，得到了這三株菌適宜的木質素降解條件。菌株Acinetobacter sp. B-2和Novosphingobium B-7適宜的降解條件為：氮源NH4NO3，氮含量0.01mol/L，pH=7，溫度為30℃，搖床轉速120r/min；菌株Pandoraea sp.

6、B-6優(yōu)化后的降解條件為：氮源NH4H2PO4，氮含量0.03mol/L，pH=7，溫度為30℃，搖床轉速120r/min。 在適宜的降解條件下，采用木質素濃度-TC標準曲線法進一步測定了菌株Acinetobacter sp. B-2的木質素降解性能，培養(yǎng)4天該菌對木質素的降解率可達40％。菌株Acinetobacter sp. B-2能夠在胞外分泌錳過氧化物酶（MnP）、木質素過氧化物酶（LiP）以及漆酶（Lac）這三種酶，