人卵母細胞輔助激活研究進展 - 生殖醫(yī)學分會

1、人卵母細胞輔助激活研究進展人卵母細胞輔助激活研究進展賈洪響，蘇丹，畢星宇，武學清賈洪響，蘇丹，畢星宇，武學清（山西省婦幼保健院生殖醫(yī)學中心，太原，（山西省婦幼保健院生殖醫(yī)學中心，太原，030000）摘要：卵胞漿內(nèi)精子注射（Intracytoplasmicsperminjection，ICSI）是目前治療男性不育最有效的方法，但在ICSI周期中仍然有13%的受精失敗發(fā)生。卵母細胞輔助激活（Assistedoocyteactivation，

2、AOA）通過施加外界刺激激活卵母細胞，可以有效克服ICSI后的受精失敗，因此近年來獲得了越來越廣泛的研究和應用，本文綜述了近年來人們在卵母細胞輔助激活機理和應用方面的研究成果，并對該技術今后的發(fā)展前景作了探討。關鍵詞：輔助激活；鈣離子震蕩；受精失??；人卵母細胞；通訊作者：武學清：Email：xueqingwu416@Tel：18035118787隨著上世紀90年代初卵胞漿內(nèi)精子注射（Intracytoplasmicsperminject

3、ion，ICSI）技術的出現(xiàn)，人類輔助生殖技術得到了很大的的提升和發(fā)展，有效克服了過去由男性因素引起的各種不育癥，成為目前治療男性不育最有效的方法[1]。ICSI主要應用于由男性因素造成的常規(guī)IVF受精失敗，其總體受精率可以達到70%以上，對患有少弱精和畸精癥等患者均有良好的效果[23]。盡管如此，在ICSI周期中仍然有13%的受精失敗發(fā)生[4]，對于引起受精失敗的原因尚存在很多爭議，Rawe等[5]發(fā)現(xiàn)在ICSI后受精失敗的卵母細胞中

4、，有39.9%是由于卵母細胞沒有正常激活，無法形成原核或者排出第二極體，表明卵母細胞的非正常激活是造成受精失敗的主要原因之一。NasrEsfahani等[6]認為由魚精蛋白缺乏所引起的染色體過早濃縮（PrematurechromosomalcondensationPCC）也是造成受精失敗的重要原因。除此之外，精子畸形（如圓頭精子）也會對ICSI受精率造成一定影響[7]。針對ICSI受精失敗的問題，近年來，不斷有文獻報道應用卵母細胞輔助激

5、活（Assistedoocyteactivation，AOA）來改善結局，取得了較為明顯的效果。雖然目前在安全性方面仍然面臨很多爭議，但該技術的進步使人們能夠成功克服ICSI后受精失敗，有望成為治療男性不育的重要輔助手段。除了精子方面的因素，卵母細胞本身在激活中也扮演著很重要的角色。有證據(jù)表明，卵母細胞在從GV期到MII期的成熟過程中建立起了Ca2的釋放機制，這期間細胞質(zhì)內(nèi)發(fā)生了一系列的變化，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重組，IP3受體增加和生化性質(zhì)的改

6、變（對IP3敏感性增加），Ca2濃度升高等[22]。而細胞核與細胞質(zhì)的不完全成熟有可能會抑制卵母細胞對PLCζ的反應[23]。同時，還有人認為卵母細胞內(nèi)的線粒體也可通過IP3和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導Ca2信號通路[24]。2ICSI受精失敗患者精子激活能力的檢測與診斷對于ICSI受精失敗的患者，我們需要確認導致ICSI受精失敗的是精源性因素還是卵源性因素，以便于制定相應的后續(xù)治療方案。目前來說，小鼠卵母細胞激活檢測（themouseoocyteac

7、tivationtestMOAT）是較為可靠的檢測方法之一，其原理是用患者的精子對小鼠卵母細胞進行ICSI，通過檢測卵母細胞的受精率，來評估患者精子的激活能力是否正常。一般根據(jù)受精率的高低把患者分為三組：1.激活率≤20%，為低激活組；2.激活率在21%84%之間，為中等激活組；3.激活率≥85%，為高激活組[25]。處于低激活組的患者提示其有精源性的功能障礙，處于高激活組的患者提示其精子激活能力正常，而處于中等激活組的患者，其受精率尚

8、不足以證明其精子的激活能力正常，還需要對其鈣離子震蕩的頻率和振幅進行檢測以確認結果。但是這種技術在實際應用中還是有很多不足，第一，只有當精子的激活率處于極低水平（≤20%）時才能認為是精源性功能障礙，當激活率高于該水平時依然無法確定受精失敗的原因；第二，人精子的磷脂酶Cζ活性高于小鼠[26]，如果MOAT結果提示患者精子對小鼠卵母細胞激活率只是略低于正常水平，實際上有可能該患者的精子并不足以激活人卵母細胞。這些因素都會降低MOAT結果的

9、準確性，同時該實驗還需要穩(wěn)定的小鼠卵母細胞來源，費時費力，也限制了該方法的廣泛應用。有研究者比較了正常人和ICSI后受精失敗患者精子的MOAT結果，發(fā)現(xiàn)受精失敗患者組的2PN率為0%(046)，而對照組的2PN率為81.5%(6681)[27]，也可以證實受精失敗患者精子的激活能力低于常人?？紤]到精子中的PLCζ在卵母細胞激活中的關鍵性作用，有人提出可以通過實時定量PCR檢測患者精子中PLCζ的表達量，以此作為評價精子激活能力的依據(jù)[2