漆酶、酪氨酸酶和辣根過氧化物酶催化酚類及苯胺化合物動(dòng)力學(xué)分析及應(yīng)用.pdf

1、目的：含酚、苯胺類廢水是環(huán)境中水污染的重要來源之一，因此，對(duì)酚類和苯胺類化合物的快速檢測(cè)是環(huán)境監(jiān)測(cè)中一項(xiàng)十分重要的內(nèi)容。本研究利用漆酶、酪氨酸酶和辣根過氧化物酶三種氧化酶對(duì)酚類及苯胺類化合物進(jìn)行動(dòng)力學(xué)特性分析，建立酚類、苯胺類化合物酶促反應(yīng)的分光光度分析方法。
　　 方法：按照功能基團(tuán)，擬選取13種代表性酚類和6種苯胺類化合物作為三種酶的待測(cè)底物。利用分光光度計(jì)光譜掃描進(jìn)行底物篩選，確定底物吸收峰，并以分光光度法分別測(cè)定酶催化0

2、～10 mg/L和0～1mg/L兩個(gè)不同濃度范圍的酚類和苯胺類化合物的反應(yīng)速率，作出底物濃度與反應(yīng)速率的標(biāo)準(zhǔn)曲線。并利用漆酶篩查并檢測(cè)了3種焦化廢水中非揮發(fā)酚類含量。同時(shí)以雙孢菇為原料，對(duì)酪氨酸酶進(jìn)行了純化分離。
　　 結(jié)果：
　　 （1）在酚類、苯胺類化合物酶促反應(yīng)的分光光度分析方法中，漆酶的底物主要以多元酚、氨基酚和多元胺為主；酪氨酸酶對(duì)底物具有較強(qiáng)的專一性，對(duì)鄰苯二酚、焦性沒食子酸和2-氨基酚具有較強(qiáng)的催化能力；辣

3、根過氧化物酶在底物的選擇性上具有廣普性，能催化氧化漆酶所不能氧化的一元胺、一元酚等化合物。利用漆酶、酪氯酸酶、辣根過氧化物酶所測(cè)定的底物濃度.反應(yīng)速率的標(biāo)準(zhǔn)曲線，除（）酶測(cè)定的聯(lián)苯胺外，均得到了較好的一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2在0.96以上。除漆酶有部分檢測(cè)物線性范圍難以達(dá)到國(guó)家酚氯及苯胺類排放標(biāo)準(zhǔn)，酪氨酸酶和辣根過氧化物酶檢測(cè)線性范圍下限（）可達(dá)到國(guó)家排放標(biāo)準(zhǔn)。
　　 （2）3種廢水中鄰苯二酚含量分別為190.5、2

4、65.8和1553mg/L，回收率在91.9‰～115.8％之間。
　　 （3）雙孢菇經(jīng)勻漿、離心、鹽析、透析、DEAE-Sephan：R Fastflow層析、濃縮、Sephadex G-75層析等一系列操作步驟，獲得了活性較高，成分單一的酪氨酸酶。該酶催化L，-DOPA的最適pH為7.0，Kx值為0.182mmol/L。
　　 結(jié)論：建立了一種多酶系統(tǒng)測(cè)定酚類和苯胺類化合物（）分光光度法，方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，